グラム陰性菌外膜タンパク質の膜挿入機構の解明

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BAM複合体は主要構成要素であるBamAと４つのリポタンパク質であるBamB-Eで構成される。BamB-Eの機能を調べるために、主要構成要素であるBamAと各１要素(BamB-E)で構成される複合体または各１要素が欠損した複合体（機能解析用複合体）を細胞外で再構成することを計画した。そして、この再構成した機能解析用複合体に基質タンパク質（Hia: インフルエンザ菌由来アドへシン）を反応させることにより複合体の機能がどのように変化するかを観察する。そして得られた結果より各リポタンパク質の機能を明らかにすることを目的とした。上記のような機能解析用複合体を細胞外で再構成するために、各タンパク質の単離精製を試みた。そして、その精製したタンパク質を用いて機能解析用複合体を再構成することを計画した。主要構成要素であるBamAタンパク質を大腸菌で発現させて精製することは以前の研究により確立されている。BamB-Eタンパク質に関しては発現精製系を確立していない為、発現ベクターの作成・大腸菌での発現・タンパク質の精製を試みた。その結果、一部のタンパク質に関しては精製系が確立された。しかし全てのタンパク質の発現精製系は確立するに至らなかった。また、機能解析用複合体を得る別の方法として、各構成要素が欠損した大腸菌株から取得する事も考えられる。この実験を行うための予備実験として、大腸菌から単離されたBAM複合体を含む膜画分を使用して基質タンパク質（Hia)のアセンブリ追跡を行なった。その結果、Hiaのアセンブリ追跡は可能であった。今後はBamB-E欠損株から機能解析用複合体を含む膜画分を取得して、各タンパク質の機能を解析することも計画している。