グラム陰性菌外膜タンパク質の膜挿入機構の解明

阐明革兰氏阴性细菌外膜蛋白的膜插入机制

• 批准号: 22K15463
• 负责人: 青木 英莉子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15463/
• 关键词: BAM複合体; オートトランスポーター; グラム陰性菌; 外膜タンパク質; OMP; 大腸菌; βバレル

BAM複合体は主要構成要素であるBamAと４つのリポタンパク質であるBamB-Eで構成される。BamB-Eの機能を調べるために、主要構成要素であるBamAと各１要素(BamB-E)で構成される複合体または各１要素が欠損した複合体（機能解析用複合体）を細胞外で再構成することを計画した。そして、この再構成した機能解析用複合体に基質タンパク質（Hia: インフルエンザ菌由来アドへシン）を反応させることにより複合体の機能がどのように変化するかを観察する。そして得られた結果より各リポタンパク質の機能を明らかにすることを目的とした。上記のような機能解析用複合体を細胞外で再構成するために、各タンパク質の単離精製を試みた。そして、その精製したタンパク質を用いて機能解析用複合体を再構成することを計画した。主要構成要素であるBamAタンパク質を大腸菌で発現させて精製することは以前の研究により確立されている。BamB-Eタンパク質に関しては発現精製系を確立していない為、発現ベクターの作成・大腸菌での発現・タンパク質の精製を試みた。その結果、一部のタンパク質に関しては精製系が確立された。しかし全てのタンパク質の発現精製系は確立するに至らなかった。また、機能解析用複合体を得る別の方法として、各構成要素が欠損した大腸菌株から取得する事も考えられる。この実験を行うための予備実験として、大腸菌から単離されたBAM複合体を含む膜画分を使用して基質タンパク質（Hia)のアセンブリ追跡を行なった。その結果、Hiaのアセンブリ追跡は可能であった。今後はBamB-E欠損株から機能解析用複合体を含む膜画分を取得して、各タンパク質の機能を解析することも計画している。

The BAM complex is composed of the main constituent elements of BamA and 4. BamB-E function modulation, the main component elements BamA and each element (BamB-E) constitute a complex, each element is deficient in the complex (function analysis complex), and the extracellular recombination is planned. The matrix of the complex for functional analysis was reconstructed and the function of the complex was observed. The result is that the quality of the product is very low. The above mentioned functional analysis complex is composed of extracellular components, and the separation and purification of each component are tried. The complex for functional analysis was reconstructed from the original one. The main components of the system are Escherichia coli, Escherichia coli and Escherichia coli. BamB-E is the key to the development and purification of bacteria. As a result, a part of the quality of the product has been established through the refinement system. The quality of the product is refined and established. A method for obtaining a complex for functional analysis is described. The preparation of this paper is based on the analysis of the BAM complex and the use of Hia. The result is that Hia's track is impossible. In the future, BamB-E defective plants will be used for functional analysis of complexes containing thin films.