グラム陰性菌外膜タンパク質の膜挿入機構の解明

阐明革兰氏阴性细菌外膜蛋白的膜插入机制

• 批准号: 22K15463
• 负责人: 青木 英莉子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15463/
• 关键词: BAM複合体; オートトランスポーター; グラム陰性菌; 外膜タンパク質; OMP; 大腸菌; βバレル

BAM複合体は主要構成要素であるBamAと４つのリポタンパク質であるBamB-Eで構成される。BamB-Eの機能を調べるために、主要構成要素であるBamAと各１要素(BamB-E)で構成される複合体または各１要素が欠損した複合体（機能解析用複合体）を細胞外で再構成することを計画した。そして、この再構成した機能解析用複合体に基質タンパク質（Hia: インフルエンザ菌由来アドへシン）を反応させることにより複合体の機能がどのように変化するかを観察する。そして得られた結果より各リポタンパク質の機能を明らかにすることを目的とした。上記のような機能解析用複合体を細胞外で再構成するために、各タンパク質の単離精製を試みた。そして、その精製したタンパク質を用いて機能解析用複合体を再構成することを計画した。主要構成要素であるBamAタンパク質を大腸菌で発現させて精製することは以前の研究により確立されている。BamB-Eタンパク質に関しては発現精製系を確立していない為、発現ベクターの作成・大腸菌での発現・タンパク質の精製を試みた。その結果、一部のタンパク質に関しては精製系が確立された。しかし全てのタンパク質の発現精製系は確立するに至らなかった。また、機能解析用複合体を得る別の方法として、各構成要素が欠損した大腸菌株から取得する事も考えられる。この実験を行うための予備実験として、大腸菌から単離されたBAM複合体を含む膜画分を使用して基質タンパク質（Hia)のアセンブリ追跡を行なった。その結果、Hiaのアセンブリ追跡は可能であった。今後はBamB-E欠損株から機能解析用複合体を含む膜画分を取得して、各タンパク質の機能を解析することも計画している。

The main elements of the BAM complex are BamA 4, BamB-E 4, BamB-E 4, and so on. Each of the main components (BamB-E) of the BamB-E complex and the main components (BamB-E) of the complex (BamB-E) can be transformed into a complex (for machine resolution) and then the extracellular matrix of the complex (for machine resolution) will be reprogrammed into a computer program. The recombinant virus can be analyzed by using the complex gene (Hia) to detect the origin of the bacteria. The complex machine can be used to detect the virus. The results show that the information mechanism is able to verify that the purpose of the test is correct. The host computer can analyze the extracellular fragment of the complex and then convert it into a template, and each of the cells will be isolated from the cell. It is possible to use the complex to analyze the complex and then convert it into a computer program. The main constituent factors are: BamA, bacteria, bacteria The BamB-E testing system is to make sure that the laboratory test is performed, and that the laboratory test is performed to verify the accuracy of the test. The results show that one of the most important information is to make sure that the information is set up. The whole system is to make sure that you are in a position to make sure that you do not know what to do. The complex analysis method was used to analyze the data, and the constituent elements were not used to obtain the data of the major strains. In this case, you will need to know that the bacteria are isolated from the BAM complex, and that the membrane painting is divided into two parts, namely, the cell phone, the cell phone, the cell line, the cell line and the line line. The results show that Hia may not be able to track the results. In the future, the BamB-E strain can be analyzed by using the complex containing membrane painting, and each cell can be analyzed by the machine.