ウイルス療法を基軸とした大腸癌に対する複合がん免疫療法の開発

基于病毒疗法的结直肠癌复杂癌症免疫疗法的开发

• 批准号: 22K16002
• 负责人: 杉村 直美
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16002/
• 关键词: 大腸癌; 腫瘍溶解性ウイルス; 免疫療法

本年度は、マウス大腸がん細胞株を用いたレオウイルスおよびSTING agonist, ADU-S100の有効性について、in vitroおよびin vivoでの検証を行う。またレオウイルスにより免疫原性細胞死(ICD;immunogenic cell death)がもたらされるかについても検証する。マウス大腸がん細胞株としては、CT26およびMC38を用いる。レオウイルスの有効性について、各細胞に、1MOI,3MOI,10MOI濃度のレオウイルスを感染させ、感染後24時間、48時間、72時間後に細胞増殖アッセイによりレオウイルスの有効性を評価する。同様に、培養液中にSTING agonist, ADU-S100を添加し、その有効性について検証する。レオウイルスによるICDについては、レオウイルスを感染させた細胞の培養液中のATP、HGMB-1を計測することで評価する。マウスを用いた実験では、免疫力の保持されたBALB/cマウスの皮下にCT26を移植する同種移植マウスモデルを用いる。まずは、マウスに移植したCT26が腫瘍を形成したところで、腫瘍内に直接、レオウイルスを投与し、腫瘍増殖抑制能を評価する。STING agonist, ADU-S100についても同様に、担がんマウスに投与し、腫瘍増殖抑制能を評価する。さらに、レオウイルおよびADU-S100を併用投与したマウスの腫瘍についても増殖能を評価する。また、レオウイルス、ADU-S100による腫瘍増殖抑制効果だけではなく、腫瘍細胞に与える影響を免疫染色により評価する。これらの抗腫瘍薬を投与後に、マウスから腫瘍を摘出する。ホルマリンで固定後に、Ki67、Cleaved Caspase-3、Granzyme Bの免疫染色を行い、細胞障害の誘導、抗腫瘍免疫の誘導について評価する。

This year, we have conducted research on the effectiveness of ADU-S100 in vitro and in vivo. It's not easy to find an ICD (immunogenic cell death). The cell lines CT26 and MC38 were used. For each cell, 1MOI,3 MOI,10MOI concentrations were used to evaluate the viability of the cells at 24, 48, and 72 hours after infection. In the same way, STING agonist, ADU-S100 is added to the culture medium, and the test results are obtained. Measurement of ATP and HGMB-1 in culture medium of infected cells The use of CT26 for allotransplantation is important for maintaining immunity. CT26 is a tumor growth inhibitor. STING AGONIST, ADU-S100- In addition, the ADU-S100 can be used to evaluate the reproduction performance of the product. The effect of tumor growth inhibition by ADU-S100 was evaluated by immunostaining. The anti-tumor agent was injected and extracted. Immunostaining for Ki67, Cleaved Caspase-3, Granzyme B, Induction of Cell Damage, Induction of Anti-tumor Immunity