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腎糸球体上皮細胞におけるstratifinの機能の解明

阐明 stratifin 在肾小球上皮细胞中的功能

基本信息

批准号：
22K16235
负责人：
安田英紀
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16235/
关键词：
ネフローゼ症候群 14-3-3蛋白質糸球体上皮細胞 Stratifin 細胞骨格 stratifin

项目摘要

Stratifin (14-3-3σ)と他の14-3-3アイソフォームの発現と局在の差を明らかにするため、ヒトおよびマウスの培養ポドサイト、ラットの腎臓と単離糸球体でRT-PCR、Western blot(WB)、免疫染色(IF)による解析を行った。Stratifinと14-3-3βの発現は未分化型に比べて分化型培養ポドサイトで高い事を示した。腎臓内でStratifinは皮質、髄質に比べて糸球体で高い発現量を示したが、14-3-3βは同等に発現する事を明らかにした。糸球体内の各細胞マーカー分子との二重染色でStratifinはポドサイトとメサンギウム細胞の一部に発現し、14-3-3βはポドサイトに限局して発現する事を示した。また、ポドサイト内でStratifinは一次突起に発現するのに対し、14-3-3βは二次突起(足突起)とスリット膜の一部に局在する事を明らかにした。次に、実験的ネフローゼ症候群モデルと傷害を誘導した培養ポドサイトで、RT-PCR、WB、IFによる解析を行った。糸球体におけるStratifin発現は微小変化型ネフローゼ症候群(MCNS)モデルで増加したが、巣状糸球体硬化症(FSGS)モデルでは減少し、アドリアマイシン(ADR)添加によって傷害された培養ポドサイトでは初期に発現が増加し、病態が進行すると低下する事を明らかにした。14-3-3βの発現はMCNSとFSGSモデル両方で低下し、ADR添加の培養ポドサイトでも低下する事を示した。これらの結果から、ポドサイト内でStratifinは一次突起に発現するのに対し、14-3-3βは足突起とスリット膜の一部に発現するという異なる局在を明らかにした。また、ポドサイト傷害モデルにおける異なる発現動態を示す事を明らかにし、Stratifinと14-3-3βがそれぞれ一次突起と足突起の病態に関与する可能性を示した。

Stratifin (14-3-3σ) and its 14-3-3 derivative were analyzed by RT-PCR, Western blot(WB), and immunostaining (IF). Stratifin 14-3-3β was found to be more active in undifferentiated cultures than in differentiated cultures. Stratifin in the kidney is higher in cortex and cytoplasm than in the sphere, and 14-3-3 beta is higher in cortex and cytoplasm than in the sphere. The double staining of the molecules in each cell in the body showed that a part of the cells in the Stratifin group were found, and that the 14-3-3β group was found only in the cells in the Stratifin group. A part of the Stratifin membrane is exposed to the 14-3-3β secondary protrusion. The secondary, real-time development of the syndrome, the induction of injury, culture, RT-PCR, WB, IF analysis Stratifin is found to be associated with an increase in micronized sclerosis syndrome (MCNS), a decrease in glomerular sclerosis (FSGS), and an increase in ADR. Stratifin is found to be associated with an increase in early culture and a decrease in pathological progression. The occurrence of 14-3-3β was demonstrated by the decrease of MCNS and FSGS in culture medium, and the decrease of ADR in culture medium. As a result, Stratifin is found in the middle of the first protrusion, and 14-3-3β is found in the middle of the second protrusion. Stratifin 14-3-3β shows the possibility of a pathological relationship between a primary protrusion and a foot protrusion