汗アレルギーにおける抗原感作経路と汗抗原感作における汗のアジュバント効果の解明

多くのアトピー性皮膚炎患者（AD）やコリン性蕁麻疹患者では汗抗原（MGL_1304）に対する特異的IgEが検出されており、またこれらの患者は真皮内タイトジャンションの不良により汗管から真皮内に汗が漏出することが報告されている。前年度に終了報告した研究（ヘアレスマウスを用いて汗をアジュバントとした皮膚免疫を行うと真皮感作で特異的抗体が増強される現象や汗刺激したケラチノサイトが特定のサイトカインの発現増強とERKのリン酸化を確認；科研費課題番号20K17319）からの続きで、汗のアジュバント効果をさらにin vitroで分子レベルのメカニズムの追求を行った。まず汗刺激したヒトケラチノサイト細胞株（HaCaT）のRNAを採取しRNAシークエンスで遺伝子の発現状況を網羅的に解析した。その中で炎症やバリア機能低下に関連する幾つかの遺伝子の発現増強を確認したので、さらにリアルタイムPCRで再現性を確認した。汗の中にはIL-1α、IL-1β、IL-31が含まれていることは既知の報告があるので、それらのサイトカインを用いてケラチノサイトを刺激したところ、汗刺激と同様な遺伝子発現増強が確認できた。また汗中の３つのサイトカインの阻害剤（IL-1RA, IL-31中和抗体）を用いたところ、汗刺激による遺伝子増強を抑制することも確認したので、汗中のこれらのサイトカインは炎症やバリア機能に関係するカスケードのトリガーになり得ることが示唆された。今後は同様の実験を、表皮繊維芽細胞を用いて行い、汗アジュバント効果の追求をすると共に、汗管バリアのタイトジャンクションに関与するClaudin3 KOマウスを用いた抗原感作実験で、アジュバントとしての汗および上記のサイトカインの効果を、抗体産生を指標に検討していく予定である。

多くのアトピー性皮膚炎患者（AD）やコリン性蕁麻疹患者では汗抗原（MGL_1304）に対する特異的IgEが検出されており、またこれらの患者は真皮内タイトジャンションの不良により汗管から真皮内に汗が漏出することが報告されている。前年度に終了報告した研究（ヘアレスマウスを用いて汗をアジュバントとした皮膚免疫を行うと真皮感作で特異的抗体が増強される現象や汗刺激したケラチノサイトが特定のサイトカインの発現増強とERKのリン酸化を確認；科研費課題番号20K17319）からの続きで、汗のアジュバント効果をさらにin vitroで分子レベルのメカニズムの追求を行った。まず汗刺激したヒトケラチノサイト細胞株（HaCaT）のRNAを採取しRNAシークエンスで遺伝子の発現状況を網羅的に解析した。その中で炎症やバリア機能低下に関連する幾つかの遺伝子の発現増強を確認したので、さらにリアルタイムPCRで再現性を確認した。汗の中にはIL-1α、IL-1β、IL-31が含まれていることは既知の報告があるので、それらのサイトカインを用いてケラチノサイトを刺激したところ、汗刺激と同様な遺伝子発現増強が確認できた。また汗中の３つのサイトカインの阻害剤（IL-1RA, IL-31中和抗体）を用いたところ、汗刺激による遺伝子増強を抑制することも確認したので、汗中のこれらのサイトカインは炎症やバリア機能に関係するカスケードのトリガーになり得ることが示唆された。今後は同様の実験を、表皮繊維芽細胞を用いて行い、汗アジュバント効果の追求をすると共に、汗管バリアのタイトジャンクションに関与するClaudin3 KOマウスを用いた抗原感作実験で、アジュバントとしての汗および上記のサイトカインの効果を、抗体産生を指標に検討していく予定である。