多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索：血清cfDNAの経時的解析

本研究は多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索のため、血清cell free DNA(cfDNA)に着目してその有用性を検討するものである。本年度は新型コロナウイルス感染症による入院制限、移動・活動制限の影響もあり、新規の臨床検体保存が予定通り進まなかった。そのため、主に既存のシークエンスデータの解析やこれまで特定されたバイオマーカー候補の遺伝子の機能解析の準備、予備データ作成を主に行った。これまでの我々の多発性骨髄腫症例の骨髄検体、cfDNAの解析ではLd療法中に特定の遺伝子変異(KRAS、RB1、CYLDなど)が新規に出現することを見出しており、これらの遺伝子が治療抵抗性に関与していることが示唆され、cfDNAでもこれらの変異を捉えることが可能であった。バイオマーカーとしての有用性が期待できるものの症例ごとに疾患背景、治療背景が異なるため、染色体異常や前治療別に解析する必要があり、対象症例を増やしながら更なる検討を進めていく。またこれらのバイオマーカー候補遺伝子の変異の有無や蛋白発現量の違いによる各種治療に対する反応性、耐性機序の解明のため、細胞株を用いた機能解析、既存臨床検体を用いた骨髄クロット標本の免疫染色などの準備を行っている。機能解析では特定の遺伝子のノックアウトの後、レナリドミドやデキサメサゾンなどの治療薬を加えることで細胞生存にどのような影響を与えるか、MTSアッセイやアポトーシスアッセイ（アネキシンV、7-AAD）を用いて検証する予定である。

本研究は多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索のため、血清cell free DNA(cfDNA)に着目してその有用性を検討するものである。本年度は新型コロナウイルス感染症による入院制限、移動・活動制限の影響もあり、新規の臨床検体保存が予定通り進まなかった。そのため、主に既存のシークエンスデータの解析やこれまで特定されたバイオマーカー候補の遺伝子の機能解析の準備、予備データ作成を主に行った。これまでの我々の多発性骨髄腫症例の骨髄検体、cfDNAの解析ではLd療法中に特定の遺伝子変異(KRAS、RB1、CYLDなど)が新規に出現することを見出しており、これらの遺伝子が治療抵抗性に関与していることが示唆され、cfDNAでもこれらの変異を捉えることが可能であった。バイオマーカーとしての有用性が期待できるものの症例ごとに疾患背景、治療背景が異なるため、染色体異常や前治療別に解析する必要があり、対象症例を増やしながら更なる検討を進めていく。またこれらのバイオマーカー候補遺伝子の変異の有無や蛋白発現量の違いによる各種治療に対する反応性、耐性機序の解明のため、細胞株を用いた機能解析、既存臨床検体を用いた骨髄クロット標本の免疫染色などの準備を行っている。機能解析では特定の遺伝子のノックアウトの後、レナリドミドやデキサメサゾンなどの治療薬を加えることで細胞生存にどのような影響を与えるか、MTSアッセイやアポトーシスアッセイ（アネキシンV、7-AAD）を用いて検証する予定である。