多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索：血清cfDNAの経時的解析

寻找生物标志物来预测多发性骨髓瘤的治疗效果：血清 cfDNA 的时程分析

• 批准号: 22K16293
• 负责人: 立田 卓登
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16293/
• 关键词: 多発性骨髄腫; cfDNA; レナリドミド

本研究は多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索のため、血清cell free DNA(cfDNA)に着目してその有用性を検討するものである。本年度は新型コロナウイルス感染症による入院制限、移動・活動制限の影響もあり、新規の臨床検体保存が予定通り進まなかった。そのため、主に既存のシークエンスデータの解析やこれまで特定されたバイオマーカー候補の遺伝子の機能解析の準備、予備データ作成を主に行った。これまでの我々の多発性骨髄腫症例の骨髄検体、cfDNAの解析ではLd療法中に特定の遺伝子変異(KRAS、RB1、CYLDなど)が新規に出現することを見出しており、これらの遺伝子が治療抵抗性に関与していることが示唆され、cfDNAでもこれらの変異を捉えることが可能であった。バイオマーカーとしての有用性が期待できるものの症例ごとに疾患背景、治療背景が異なるため、染色体異常や前治療別に解析する必要があり、対象症例を増やしながら更なる検討を進めていく。またこれらのバイオマーカー候補遺伝子の変異の有無や蛋白発現量の違いによる各種治療に対する反応性、耐性機序の解明のため、細胞株を用いた機能解析、既存臨床検体を用いた骨髄クロット標本の免疫染色などの準備を行っている。機能解析では特定の遺伝子のノックアウトの後、レナリドミドやデキサメサゾンなどの治療薬を加えることで細胞生存にどのような影響を与えるか、MTSアッセイやアポトーシスアッセイ（アネキシンV、7-AAD）を用いて検証する予定である。

This study aims to explore the usefulness of serum cell free DNA(cfDNA) in predicting the therapeutic outcome of multiple osteoma. This year, the hospital admission limit, mobility limit, and new regulations for clinical specimen preservation have been improved. The analysis of the existing information and the preparation of the function analysis of the candidate information for the specific information and the preparation of the main information are carried out. The analysis of bone marrow and cfDNA in patients with multiple osteoma has been shown to be related to therapeutic resistance of specific gene variants (KRAS, RB1, CYLD) in Ld therapy. The usefulness of chromosome abnormalities is expected to be discussed in disease background, treatment background, chromosome abnormalities, and pre-treatment analysis. The difference between the candidate gene and the protein expression level is related to the reaction, the understanding of the tolerance mechanism, the functional analysis of the cell line, and the preparation of the immunostaining of the existing clinical sample. Function analysis: After the specific gene is released, the treatment agent is added to the cell survival, and the MTS is released from the treatment agent (7-AAD).