多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索：血清cfDNAの経時的解析

寻找生物标志物来预测多发性骨髓瘤的治疗效果：血清 cfDNA 的时程分析

• 批准号: 22K16293
• 负责人: 立田 卓登
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16293/
• 关键词: 多発性骨髄腫; cfDNA; レナリドミド

本研究は多発性骨髄腫での治療効果予測バイオマーカー探索のため、血清cell free DNA(cfDNA)に着目してその有用性を検討するものである。本年度は新型コロナウイルス感染症による入院制限、移動・活動制限の影響もあり、新規の臨床検体保存が予定通り進まなかった。そのため、主に既存のシークエンスデータの解析やこれまで特定されたバイオマーカー候補の遺伝子の機能解析の準備、予備データ作成を主に行った。これまでの我々の多発性骨髄腫症例の骨髄検体、cfDNAの解析ではLd療法中に特定の遺伝子変異(KRAS、RB1、CYLDなど)が新規に出現することを見出しており、これらの遺伝子が治療抵抗性に関与していることが示唆され、cfDNAでもこれらの変異を捉えることが可能であった。バイオマーカーとしての有用性が期待できるものの症例ごとに疾患背景、治療背景が異なるため、染色体異常や前治療別に解析する必要があり、対象症例を増やしながら更なる検討を進めていく。またこれらのバイオマーカー候補遺伝子の変異の有無や蛋白発現量の違いによる各種治療に対する反応性、耐性機序の解明のため、細胞株を用いた機能解析、既存臨床検体を用いた骨髄クロット標本の免疫染色などの準備を行っている。機能解析では特定の遺伝子のノックアウトの後、レナリドミドやデキサメサゾンなどの治療薬を加えることで細胞生存にどのような影響を与えるか、MTSアッセイやアポトーシスアッセイ（アネキシンV、7-AAD）を用いて検証する予定である。

这项研究的重点是无血清细胞DNA（CFDNA），并检查其有用性，以寻找预测多发性骨髓瘤治疗有效性的生物标志物。由于COVID-19造成的住院限制以及Covid-19引起的运动和活动的限制的影响，新的临床标本存储并未按计划进行。因此，我们主要对现有序列数据进行了分析，准备了先前鉴定的生物标志物候选物基因的功能分析以及初步数据的准备。在LD疗法期间，已经发现对多种骨髓瘤病例的骨髓标本和CFDNA的先前分析已出现了新的遗传突变（例如KRAS，RB1，CYLD），这表明这些基因参与治疗耐药性，并且有可能在CFDNA中捕获这些突变。尽管预计它可以作为生物标志物有用，但每种情况的疾病和治疗背景都不同，因此对于每种染色体异常或预处理都是必要的分析，并且将在增加目标病例的同时进行进一步的研究。此外，为了阐明生物标志物候选基因中突变的差异，对各种治疗和耐药机制的反应性，蛋白质表达水平的差异，使用现有临床标本的骨髓样品的功能分析以及使用细胞系进行了功能分析，例如使用细胞系进行功能分析。在功能分析中，我们将研究使用MTS分析和凋亡测定法（Annexin V，7-AAD）敲除特定基因后，添加诸如Lenalidomide或地塞米松等治疗药物对细胞存活的影响。