腹膜中皮細胞由来エクソソームの解析に基づく胃癌腹膜転移の新規治療法の開発

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本研究の目的は「胃癌腹膜転移の進展における中皮細胞の分泌するエクソソームの役割を解明し、難治性である胃癌腹膜転移の新しい治療法の開発」であり、まず研究実施計画I.「中皮細胞が分泌するエクソソームの胃癌細胞の遊走浸潤へ及ぼす影響」の検討を行なった。研究実施計画I-①.「中皮細胞が分泌するエクソソームの採取」は胃癌患者の腹水より分離培養を行い、合計４株の中皮細胞株を樹立した。樹立した中皮細胞株の培養上清を採取し、超遠心法によりエクソソームの分離を行なった。回収したエクソソームはウエスタンブロットによりエクソソームマーカー (CD9, CD63, CD81)の発現を同定し、電子顕微鏡による観察により細胞外小胞を同定し、エクソソームの存在を確認した。蛍光色素のPKH26で標識した中皮細胞株由来のエクソソームを胃癌細胞株（スキルス型および分化型）に添加したところ、いずれの胃癌細胞の細胞質内にエクソソームの取り込みが確認できた。また 研究実施計画I-②.「胃癌細胞の遊走浸潤へ及ぼす影響」は回収した中皮細胞由来のエクソソームを胃癌細胞株へ添加し、遊走能はWound healing assay、浸潤能はMatrigel invasion assay により検討した。Wound healing assayでは、中皮細胞由来のエクソソームはスキルス胃癌細胞株の遊走能を有意に促進した。一方、分化型胃癌細胞株の遊走能には影響しなかった。またMatrigel invasion assayでは、中皮細胞由来のエクソソームはスキルス胃癌細胞株の浸潤能を有意に促進した。今後、サイトカインアレイにより中皮細胞由来のエクソソームに含まれるサイトカインを解析し、胃癌細胞の遊走浸潤を促進する分子の同定を行う予定である。