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腹膜中皮細胞由来エクソソームの解析に基づく胃癌腹膜転移の新規治療法の開発

基于腹膜间皮细胞来源的外泌体分析，开发胃癌腹膜转移的新治疗方法

基本信息

批准号：
22K16540
负责人：
杉本敦史
金额：
$ 3万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16540/
关键词：
エクソソームスキルス胃癌中皮細胞

项目摘要

本研究の目的は「胃癌腹膜転移の進展における中皮細胞の分泌するエクソソームの役割を解明し、難治性である胃癌腹膜転移の新しい治療法の開発」であり、まず研究実施計画I.「中皮細胞が分泌するエクソソームの胃癌細胞の遊走浸潤へ及ぼす影響」の検討を行なった。研究実施計画I-①.「中皮細胞が分泌するエクソソームの採取」は胃癌患者の腹水より分離培養を行い、合計４株の中皮細胞株を樹立した。樹立した中皮細胞株の培養上清を採取し、超遠心法によりエクソソームの分離を行なった。回収したエクソソームはウエスタンブロットによりエクソソームマーカー (CD9, CD63, CD81)の発現を同定し、電子顕微鏡による観察により細胞外小胞を同定し、エクソソームの存在を確認した。蛍光色素のPKH26で標識した中皮細胞株由来のエクソソームを胃癌細胞株（スキルス型および分化型）に添加したところ、いずれの胃癌細胞の細胞質内にエクソソームの取り込みが確認できた。また研究実施計画I-②.「胃癌細胞の遊走浸潤へ及ぼす影響」は回収した中皮細胞由来のエクソソームを胃癌細胞株へ添加し、遊走能はWound healing assay、浸潤能はMatrigel invasion assay により検討した。Wound healing assayでは、中皮細胞由来のエクソソームはスキルス胃癌細胞株の遊走能を有意に促進した。一方、分化型胃癌細胞株の遊走能には影響しなかった。またMatrigel invasion assayでは、中皮細胞由来のエクソソームはスキルス胃癌細胞株の浸潤能を有意に促進した。今後、サイトカインアレイにより中皮細胞由来のエクソソームに含まれるサイトカインを解析し、胃癌細胞の遊走浸潤を促進する分子の同定を行う予定である。

The purpose of this study is to "understand the secretion of mesothelioma cells in the progression of peritoneal metastasis of gastric cancer and develop a new treatment for peritoneal metastasis of refractory gastric cancer." The study was conducted on the effects of migration, invasion and metastasis of gastric cancer cells on the secretion of mesothelioma cells. Research implementation plan I-①. "Mesothelioma cell secretion is easy to collect" We isolated and cultured ascites from gastric cancer patients, and established 4 mesothelioma cell lines in total. The culture supernatant of the established mesothelioma cell line was isolated by ultra-long-distance method. The detection of extracellular vesicles by electron microscopy and the identification of the presence of the complex (CD9, CD63, CD81) were confirmed. PKH26 identifies the origin of mesodermic cell lines and the identification of gastric cancer cell lines (both types and differentiation types). Research implementation plan I-②. "Migration, Infiltration and Effects of Gastric Cancer Cells" is a review of the origin of mesothelioma cells, the addition of gastric cancer cell lines, migration, wound healing assay, infiltration, and Matrigel invasion assay. Wound healing assay is intended to promote the migration of gastric cancer cell lines. A square, differentiated gastric cancer cell line migration can be affected. The Matrigel invasion assay is intended to promote the invasion of gastric cancer cell lines. In the future, the molecular identity of the origin of mesothelioma cells, including the analysis of mesothelioma cells, and the promotion of migration and infiltration of gastric cancer cells will be determined.