HSPによる心臓eNOS活性化の分子解明と薬理学的プレコンディショニングの開発

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我々は、従来知られていた麻酔薬のプレコンディショニング効果に加えて、Ca2+拮抗薬であるシルニジピンがプレコンディショニング効果を持つこと、熱ショック蛋白HSP90を介するeNOSの活性化によることなどを報告した（Minato et al. Hypertens Res. 2020 May;43(5):380-388.）。この現象がシルニジピン単独の効果なのか、それともlong actingなCa2+拮抗薬のclass effectであるのかを明らかにする必要がある。そこで、シルニジピンと同じカテゴリーに属するCa2+拮抗薬アゼルニジピンでも同様の効果があるかを探索する。本年度はマウス心房筋由来HL-1細胞を用いてeNOSリン酸化、nNOS発現、NO産生に及ぼす効果について検討した。①まず、HL-1細胞を使用して、アゼルニジピンのeNOSリン酸化をウエスタンブロット法で確認すると、用量依存性にアゼルニジピンは有意にeNOSリン酸化を増強した。②また、アゼルニジピンは一酸化窒素合成酵素の他のアイソフォームであるnNOS蛋白発現に関しても用量依存性に有意に増強した。③次に、実際にアゼルニジピンがNO合成を促進するかどうか検討した。アゼルニジピンに加え、NO供与体であるSNAP、NO合成酵素阻害薬であるL-NAMEを使用し、NO測定キット（比色法）で測定した。アゼルニジピンは、NO供与体であるSNAPと同様にNO合成を増加させ、その作用はL-NAMEで抑制された。ここまでの結果から、Ca2+拮抗薬シルニジピンだけでなく、同じカテゴリーに属するCa2+拮抗薬アゼルニジピンもシルニジピンと同様にプレコンディショニング効果を持つ可能性があり、それにより心筋保護作用を発揮するのではと考察している。