炎症性骨破壊におけるプロテアーゼによる破骨細胞分化促進作用の解析

点击翻译按钮获取中文摘要

in vivo の実験として顎骨感染モデルマウスの確立、LPS誘発マウス頭蓋骨炎症モデルの解析を行っている。顎骨感染モデルマウスに関しては繰り返し実験を行い、モデルマウスの確立がされつつある。LPS誘発マウス頭蓋骨炎症モデルでは、LPSを様々な濃度で投与しているが、炎症が誘発されずモデルマウスの確立がされていない。in vitro の実験として骨芽細胞および破骨細胞に由来する新たなプロテアーゼのOPG分解能を解析する。OPGを分解する新たなプロテアーゼとして応募者は骨芽細胞由来のMMP-9、破骨細胞由来のカテプシンKに着目した。 MMP-9およびカテプシンKのOPG分解能をWestern Blottingにて評価を行なったが、MMP-9はOPGを分解しなかったが、カテプシンKは濃度依存的にOPGを分解した。カテプシンKとの反応により生成されたオステオプロテゲリンの３７ｋフラグメントは、反応時間に応じて、１３ｋフラグメントを含む低分子量フラグメントにさらに分解された。 ３７ｋフラグメントの N 末端アミノ酸配列は、オステオプロテゲリンと一致し、カテプシンKがオステオプロテゲリンのデス ドメイン様領域を優先的に加水分解し、RANKL 結合能を消失すると考えられた。 最後に、カテプシンKは、オステオプロテゲリンの添加によって抑制された RANKL 依存性破骨細胞分化を回復させ、テプシンKは破骨細胞形成の正の調節因子であることが示唆された。