II 型子宮体癌モデル培養細胞株の創出と発癌および悪性化機序の解明

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II 型子宮体癌は、萎縮内膜から遺伝子変異の蓄積を経て悪性度の高い浸潤癌に至るとされている。代表的な組織型である漿液性癌とその初期病変である漿液性子宮内膜上皮内癌において、高頻度に認められる遺伝子変異は複数確認されているが、難治性希少癌であることから基礎研究に使える培養細胞株や動物モデルがないため、それらの発癌およびその悪性化に寄与する分子遺伝学的異常は十分には特徴づけられていない。そこで本研究では、マウス正常子宮内膜の上皮細胞をベースに複数の点変異導入を組み合わせて行うことによって、腫瘍形成初期段階における病態形成過程を再現するII型子宮体癌モデル培養細胞株を作成し、発癌および悪性化における遺伝子異常の関連性とその分子機序を明らかにすることを目的とする。初年度は、マウス子宮内膜上皮細胞の採取と細胞作成条件の検討を実施した。子宮内膜上皮細胞の採取には、マウスから摘出した子宮をトリプシン処理および緩徐なボルテックスを繰り返すことによりシート状の上皮細胞群を得る方法を採用した。採取した細胞を用いて上皮マーカーおよび間質マーカーを免疫蛍光染色した結果、初回のボルテックスにより得られた細胞群において、上皮マーカー陽性細胞群を高収率で採取することに成功した。2 回目以降のボルテックスでは、上皮細胞の収率低下が認められたため、初回のボルテックス処理後の細胞群のみ、実験に採用することにした。現在、得られた上皮細胞群を用いて遺伝子導入効率を上げる条件検討を実施している。また、本研究の目的である点変異ゲノム編集には、CRISPR/Cas9システムを採用している。点変異のゲノム編集はノックアウトよりも確率が大きく低下することから、上記の遺伝子導入効率条件を確立する間にマウス線維芽細胞株であるMEFを用いて編集効率向上を試みている。