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細胞はどのようにして変異型UDP-グルクロン酸転移酵素を選択的に排除するのか

细胞如何选择性消除突变的 UDP-葡萄糖醛酸基转移酶？

基本信息

批准号：
09780580
负责人：
衣斐義一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ヒト肝mRNAを逆転写したものを鋳型にし、ヒトUGT1A1に特異的なプライマーを用いてcDNAを増幅した。(2)Crigler-Najjar症候群を発症する患者より得られた変異型UGT1A1の配列を元に、部位特異的変異導入法により次に示す4種の変異を導入した。重症の高ビリルビン血症を示すタイプIに属する変異Q357End(357番目のグルタミンのコドンが終始コドンに変化)、K417i(417番目のリジンのコドンに1塩基が挿入されフレームシフトが生じ11残基の関係ないアミノ酸が付加される)、およびK437End(437番目のリジンのコドンが終始コドンに変化)、また比較的軽症のタイブIIに属する変異L15R(15番目のロイシンがアルギニンに変化しシグナル配列が異常になる)。(3)これらをpUCDSRαに組み込み発現ベクターを構築し、リン酸カルシウム法によりCOS細胞に導入した。(4)正常型UGT1A1は分子量が約52,000で小胞体膜の内腔側に局在し糖鎖で修飾されており、約14時間の半減期で分解された。またビリルビンに対するグルクロン酸抱合活性を持っていた。(5)Q357End、K417i、およびK437Endはすべて小胞体内腔に局在し膜と結合していなかったが、糖鎖修飾は受けていた。これら3種の変異体の分解半減期は正常型とほぼ同じであったが、ビリルビンに対するグルクロン酸抱合活性を持っていなかった。(6)L15Rは分子量が約51,000で、約40分の半減期で速やかに分解された。さらにL15Rは局在が異常で、小胞体膜の細胞質側にゆるく結合した状態あるいは細胞質に存在する事が分かった。細胞をラクタシスチンなどで処理するとL15Rの速やかな分解が抑制されることより、L15Rは本来の小胞体に局在しないため細胞質のプロテアソームにより速やかに分解される事が分った。

(1) use the word "cDNA" in the reverse direction of "mRNA" in the liver to write "cDNA" and "cDNA" in the special word of "liver". (2) in patients with Crigler-Najjar syndrome, patients with atypical UGT1A1 were assigned to four types of UGT1A1 with specific location and specific location. Severe hyperlipidemia indicates that the disease is caused by Q357End, K417i, K437End, K437End, and so on. The symptoms of the disease, the II, belong to the family L15R (15 orders). (3) the pUCDSR alpha system can be used to determine whether there are any changes in the COS cells. (4) the molecular weight of normal UGT1A1 was about 52000, and the microsomal membrane was decomposed in about 14 hours after the repair of glucose. The acid-binding activity of the acid-binding agent was determined by the acid-binding activity. (5) Q357End, K417i, K437End and so on, the lumen of the microcysts were combined with the membrane, and the glucose was repaired. In the half period of the decomposition of the three kinds of yeast, the normal type was the same as that of the normal group, and the acid binding activity was maintained in the same period. (6) the molecular weight of L15R is about 51000 and 40 minutes, respectively. In the L15R office, there is a significant difference between the normal and small cell membrane conditions in combination with the status quo. The L15R decomposes the cells quickly and suppresses the growth of the small cell bodies.