膜蛋白質の局在化に働くモチーフPDZドメインをもつ分子群ZO-1/ZO-2の解析

ZO-1/ZO-2 的分析，这是一种具有基序 PDZ 结构域的分子组，在膜蛋白定位中发挥作用

• 批准号: 09780654
• 负责人: 伊藤 雅彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780654/
• 关键词: PDZドメイン; ZO-1; tight junction; ZO-2; targeting

細胞間接着構造の形成には、多くの、膜タンパク質および細胞内タンパク質間の相互作用が必要である。この相互作用がどの様にしてオーガナイズされているのか明らかにすることは、発生過程における種々の細胞の挙動、また癌化・転移のプロセスなど細胞間接着が関わる様々な問題を解き明かすことにつながると思われる。近年、two-hybridsystemを含む種々の手法により、上皮細胞間の接着部位に局在する新規タンパク質も多数同定されてきた。特にtightjunctionについては、形態学的なtight junctionの特徴であるいわゆるstrand構造を形成する実体として、膜タンパク質クローディンが同定され、さらに、細胞内タンパク質としてPDZドメインをもつASIP,MAGI-1などが同定された。本年度、私は膜タンパク質クローディンとtight junctionに局在するPDZドメインを持つ膜裏打ちタンパク質ZO-1,ZO-2,ZO-3,ASIP,MAGI-1との相互作用について詳しい解析を行った。まず、マウス線維芽細胞L細胞に外来生にクローディンを発現させた細胞C1LにおいてZO-1,ASIPの局在を調べた。ZO-2,ZO-3,MAGI-1についてはC1L細胞に内在性に発現していなかったため、C1L細胞に外来性に発現させクローディンの分布と比較を行った。その結果、ZO-1,ZO-2,ZO-3はクローディンと一致した局在を示し、ASIP,MAGI-1は異なった分布パターンをとっていた。免疫沈降および組み換えタンパク質を用いたin vitroの結合実験から、クローディンのC末端2アミノ酸のモチーフYVにZO-1,ZO-2,ZO-3のPDZ1ドメインが直接結合することなどが明らかになった。

Cell indirectly the tectonic の form に は, multiple く の, membrane タ ン パ ク qualitative お よ び intracellular タ ン パ の interaction between ク qualitative が necessary で あ る. こ の interaction が ど の others に し て オ ー ガ ナ イ ズ さ れ て い る の か ら Ming か に す る こ と は, 発 process に お け る kind 々 の cells の 挙, ま た canceration, planning to move の プ ロ セ ス な ど cells with indirect が masato わ る others 々 な を solutions き Ming か す こ と に つ な が る と think わ れ る. In recent years, the two - hybridsystem を む 々 species. の gimmick に よ り and の between epithelial cells and then に bureau in す る new rules タ ン パ ク qualitative も most be さ れ て き た. The にtightjunctionに に て て て, morphology なtight Junction の, 徴 で あ る い わ ゆ る を strand structure form す る be body と し て, membrane タ ン パ ク qualitative ク ロ ー デ ィ ン が with fixed さ れ, さ ら に, intracellular タ ン パ ク qualitative と し て PDZ ド メ イ ン を も つ ASIP, tells - 1 な ど が be さ れ た. This year, private は membrane タ ン パ ク qualitative ク ロ ー デ ィ ン と tight junction に bureau in す る PDZ ド メ イ ン を hold つ membrane at ち タ ン パ ク ZO - 1, ZO - 2, ZO, ASIP, tells - 1 と の interaction に つ い て detailed し い parsing line を っ た. ま ず, マ ウ ス line L d bud cells に foreign born に ク ロ ー デ ィ ン を 発 now さ せ た cells C1L に お い て ZO - 1, ASIP の bureau in を adjustable べ た. ZO - 2, ZO - 3, tells - 1 に つ い て は C1L cells に internality に 発 now し て い な か っ た た め, C1L cells に foreign に 発 now さ せ ク ロ ー デ ィ ン の distribution line と compare を っ た. ZO そ の results, ZO - 1, 2, 3 は ZO - ク ロ ー デ ィ ン と consistent し た bureau in を し, ASIP, tells - 1 は different な っ た distribution パ タ ー ン を と っ て い た. Immune sink お よ み び group in え タ ン パ ク qualitative を with い た in vitro の combination be 験 か ら, ク ロ ー デ ィ ン の C terminal 2 ア ミ ノ acid の モ チ ー フ YV に ZO - 1, ZO - 2, ZO - 3 の PDZ1 ド メ イ ン が directly combined す る こ と な ど が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Hirase,T.et al.: "Occludin as a possible determinant of tight junction permeability in endothelial Cells" The Journal of Cell Science. 110. 1603-1613 (1997)

Hirase,T.et al.：“Occludin 作为内皮细胞紧密连接通透性的可能决定因素”《细胞科学杂志》。

Doi Y, et al: "Normal elevelopment of mice and unimpaired Cell odheson/Cell motility/actin-based cytoskeletcor without compensatory up-regulation of ezrinor radixin inmoesin gene knakocrt" Journal of Biological Chemistry. 274・4. 2315-2321 (1999)

Doi Y 等人：“小鼠的正常水平和未受损的细胞粘连/细胞运动性/基于肌动蛋白的细胞骨架，而没有 ezrinor radixin inmoesin 基因 knakocrt 的补偿性上调”《生物化学杂志》274·4 (1999)。