細胞周期制御リン酸化酵素(PLK)の癌化誘導機序

细胞周期控制激酶（PLK）的致癌机制

• 批准号: 09780659
• 负责人: 濱中 良志
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780659/
• 关键词: PLKリン酸化酵素; 細胞周期; 分裂期

昨年までの研究で、膀胱癌の臨床標本を用いてPLK(Polo-like kinase)が癌領域に特異的に染色されることを報告してきた。そこで、現在、尿中に剥離してくる膀胱癌の特性を利用して、膀胱癌の早期診断に役立てはしないかを検討しようとしている。すなわち尿を採取して、遠心分離後、沈殿した細胞よりRNAを抽出し、RT-PCR法にてPLKの発現を検討している。ここで膀胱炎の際に出現してくる白血球が混在し分裂中の白血球もPLKが発現していることが考えられる。よって、この問題点を克服するために、白血球細胞と膀胱癌細胞の比重の差を利用して、グリセロールやショ糖の密度勾配法を行い、炎症性の白血球の除去を試みている。また、最近臨床応用された抗癌剤タキソールの作用機序の一つが微小管形成の阻害である。他方PLKの作用の一つが、微小管の形成に深く関与していることを既に、我々は報告している。そこで膀胱癌よりタキソールの耐性細胞を樹立した所、対数増殖期におけるPLKmRNAの発現は、タキソール耐性細胞が親株に比較して有意に上昇していた。そこで、親株とタキソール耐性細胞をダブルチミジングブロック法を用いて、細胞を同調させ、休止(G1)期、S期(DNA合成)、分裂(M)期における細胞集団を得て、PLKmRNAならびにタンパク質を抽出して、その発現の程度を解析中である。更に、現在PLKを遺伝子導入して、タキソール耐性を獲得できるかを確かめるために、PLK過剰発現細胞をクローニング中である。

The study of PLK(Polo-like kinase) in bladder cancer was carried out last year. The characteristics of bladder cancer can be used in the early diagnosis of bladder cancer The detection of PLK by RT-PCR is discussed after the isolation of DNA, the isolation of RNA from cells, and the detection of PLK by PCR. White blood cells are mixed in the process of cystitis. White blood cells are mixed in the process of cystitis. To overcome this problem, we should make use of the difference in the specific gravity of white blood cells and bladder cancer cells, and try to remove inflammatory white blood cells by using the density matching method of white blood cells and bladder cancer cells. Recently, the mechanism of action of anti-cancer agents has been used to prevent the formation of microtubules. The role of PLK in other parties is closely related to the formation of micro-tubes, and we report on them. The expression of PLK mRNA in bladder cancer resistant cells increased significantly compared with parental cells. The analysis of PLK mRNA expression in cell populations during the rest (G1), S (DNA synthesis) and M (mitosis) phases of the cell cycle. In addition, PLK gene transfer is now carried out, and the resistance to PLK gene transfer is obtained.

项目成果

Smith MR,Hamanaka R.et.al.: "Malignant transformation of mammalian cells initiated by constitutive expression of the polo-like kinase." Biochem.Biophys.Res.Commum.234(2). 397-405 (1997)

Smith MR，Hamanaka R.et.al.：“由 polo 样激酶的组成型表达引发的哺乳动物细胞的恶性转化。”