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中枢神経細胞の核内情報伝達機構におけるジアシルグリセロールキナーゼの機能解析

二酰甘油激酶在中枢神经细胞核信号转导机制中的功能分析

基本信息

批准号：
09780700
负责人：
後藤薫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

IV型DGキナーゼ(DGK-IV)は、DGキナーゼアイソザイムの中で核移行シグナルを持つユニークなものであり、細胞核内におけるイノシトール情報伝達系に関わることが示唆されている。我々は、このIV型DGキナーゼの機能を解析する目的で、遺伝子導入COS細胞においてエピトープタグ抗体を用い、IV型DGキナーゼが細胞核内に局在することを報告してきた。本研究では、非増殖細胞である神経細胞でのIV型DGキナーゼの細胞内局在を明らかにする目的で、昆虫細胞(sf21)発現系を用いてIV型DGキナーゼの部分蛋白を発現させ、これを抗原として家兎免疫抗体を作製し、免疫組織化学的検索を行った。ラット脳ホモジネートを用いてウエスタンブロットを行ったところ、作製した抗体はIV型DGキナーゼの推定分子量104kDa付近で単一バンドを認識した。免疫組織化学的検索では、4%パラホルムアルデヒドあるいはPLP灌流固定ラットの脳を材料にし、抗体は発現蛋白によるアフィニティ精製したものを用いた。IV型DGキナーゼの免疫陽性反応は、大脳および小脳の大部分の神経細胞の核内に、様々な発現強度で検出された。特に、大脳皮質第V層の錐体細胞や小脳プルキンエ細胞などの大型の神経細胞では核内の免疫反応も強く、加えて細胞体および樹状突起などにもび漫性の免疫反応が認められた。神経細胞核内の免疫反応は、均一ではなく粗な顆粒状に検出され、核小体と思われる領域は陰性であった。

Type IV DG (DGK-IV), DG The purpose of this study is to analyze the function of type IV DG in COS cells and to report the use of antibodies to type IV DG in COS cells. In this study, we investigated the intracellular distribution of type IV DG in human neurons and non-proliferative cells. We also investigated the expression of some proteins in insect cells (sf21) by immunohistochemistry. The putative molecular weight of type IV DG was estimated to be 104kDa. Immunohistochemical assay: 4% of the samples were collected and purified by PLP. Type IV DG cells show strong immunoreactivity in the nucleus of most neurons, both large and small. In particular, pyramidal cells in the fifth layer of the cortex of the brain, small pyramidal cells, large neuronal cells, strong immune responses in the nucleus, increased cellular bodies, dendritic processes, and diffuse immune responses The immune response in the nucleus of the neuron is uniform, coarse and granular, and the nucleosomes are negative.