ダイズタンパク質グリシニンのX線結晶構造解析と血清コレステロール値低下能の強化

大豆蛋白甘氨酸的X射线晶体结构分析及其降低血清胆固醇水平的增强能力

• 批准号: 10760080
• 负责人: 安達 基泰
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760080/
• 关键词: ダイズタンパク質; X線結晶構造解析; 品質変換; グリシニン; 微生物発現; コレステロール

本研究の目的は、グリシニンA3B4のプロ型及び成熟型の立体構造をX線結晶構造解析によって明らかにし、血清コレステロール値低下能を強化したグリシニンを設計することである。今年度は、プログリシニンA3B4のX線結晶構造解析と、胆汁酸結合活性をもつペプチドの導入を試みた。1.プログリシニンA3B4のX線結晶構造解析昨年度得られた回折データを用いて、プログリシニンA3B4のX線結晶構造解析を行った。結晶は空間群P_1に属していた。プログラムX-PLORと成熟型グリシニンA3B4のモデルを使って、分子置換法により位相を求めたところ、非結晶単位中に2つの3量体を含むことが明らかとなった。回析データと成熟型グリシニンA3B4のモデルから、プログリシニンA3B4のモデルをR値23%まで精密化した。その結果、プログリシニンA3B4と成熟型グリシニンA3B4の基本構造に大きな差がないことが明らかとなった。2.サブユニットA3B4への血清コレステロール値低下機能の導入AlaBlbサブユニットに存在する胆汁酸結合活性をもつペプチドは、A3B4サブユニットにおいても同様にN末端側のバレル中に存在することが確認された。中でも特に疎水性度が高く胆汁酸結合活性に重要であると考えられた部分はストランドHに位置していることが明らかとなった。プロおよび成熟型A3B4のモデルを用いて、胆汁酸結合活性の導入をシュミレーションしたところ、P130A、Y131W、E139Tのすべての変異導入が可能であると判断された。そこで、プログリシニンA3B4サブユニットの大腸菌を用いた発現系を使って、改良A3B4サブユニットの構造形成能の検証を行った。その結果、改良A3B4サブユニットは可溶性画分に回収され、グリシニンの血清コレステロール値低下能の強化が可能であると考えられた。

は の purpose, this study グ リ シ ニ ン A3B4 の プ ロ type and maturity type の び three-dimensional structure を X-ray crystal structure parsing に よ っ て Ming ら か に し, serum コ レ ス テ ロ ー ル numerical can low を strengthening し た グ リ シ ニ ン を design す る こ と で あ る. This year, the X-ray crystal structure analysis of <s:1> and プログリシニ <s:1> A3B4 <s:1> と and the bile acid binding activity を プログリシニ ペプチド <s:1> were introduced into を tests みた. 1. プ ロ グ リ シ ニ ン A3B4 の X-ray crystal structure last year to ら れ た inflexion デ ー タ を with い て, プ ロ グ リ シ ニ ン A3B4 の X-ray crystal structure parsing line を っ た. The crystalline <s:1> space group P_1に belongs to the genus て て た た. プ ロ グ ラ ム X-ray PLOR と mature グ リ シ ニ ン A3B4 の モ デ ル を make っ て, molecular displacement method に よ り phase を o め た と こ ろ, non-crystalline 単 に 2 つ の 3 quantity body contains を む こ と が Ming ら か と な っ た. Back analysis デ ー タ と mature グ リ シ ニ ン A3B4 の モ デ ル か ら, プ ロ グ リ シ ニ ン A3B4 の モ デ ル を R nt 23% ま で motors し た. そ の results, プ ロ グ リ シ ニ ン A3B4 と mature グ リ シ ニ ン A3B4 の basic construction に big き な poor が な い こ と が Ming ら か と な っ た. 2. サ ブ ユ ニ ッ ト A3B4 へ の serum コ レ ス テ ロ ー ル numerical function of low の import AlaBlb サ ブ ユ ニ ッ ト に exist す る bile acid binding activity を も つ ペ プ チ ド は, A3B4 サ ブ ユ ニ ッ ト に お い て も with others に N terminal side の バ レ ル に exist す る こ と が confirm さ れ た. In で も, に 疎 high water-based degrees が く bile acid binding activity に important で あ る と exam え ら れ た part は ス ト ラ ン ド H に position し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. プ ロ お よ び mature A3B4 の モ デ ル を with い て, bile acid binding activity の import を シ ュ ミ レ ー シ ョ ン し た と こ ろ, P130A, Y131W, E139T の す べ て の - different import が may で あ る と judgment さ れ た. そ こ で, プ ロ グ リ シ ニ ン A3B4 サ ブ ユ ニ ッ ト の coliform を with い た 発 now is を make っ て, improved A3B4 サ ブ ユ ニ ッ ト の structure can form の 検 line card を っ た. そ の result, improved A3B4 サ ブ ユ ニ ッ ト は soluble draw points に back 収 さ れ, グ リ シ ニ ン の serum コ レ ス テ ロ ー ル numerical can low の may strengthen が で あ る と exam え ら れ た.