ニワトリ卵白由来リゾチームの抗体産生促進活性に関する研究

鸡蛋清溶菌酶促进抗体产生的活性研究

基本信息

批准号：
10760083
负责人：
菅原卓也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリ卵白由来リゾチームが、ハイブリドーマやリンパ球の抗体産生を促進することを明らかにしてきた。そこで本研究では、リゾチームがどのようにハイブリドーマやリンパ球の抗体産生を促進するかを明らかとするために、その作用機構の解明を目的として研究を行った。実験にはヒトIgM型モノクローナル抗体を産生するヒト型ハイブリドーマHB4C5細胞を用い、様々なタンパク質合成阻害剤で処理したHB4C5細胞へのリゾチームの抗体産生促進効果を検討した。その結果、アクチノマイシンDで転写活性を抑制されたHB4C5細胞に対してリゾチームは抗体産生促進活性を示し、その作用点が転写段階以降であることが推察された。次に、翻訳阻害剤であるシクロヘキシミド、およびフッ化ナトリウム処理したHB4C5細胞に対する効果を検討したところ、いずれの翻訳阻害剤処理によってもその活性発現が抑制を受けた。さらに、分泌抑制剤であるモネンシン処理したところ、抗体の分泌は抑制されたものの、リゾチームにより細胞内の抗体蓄積量はコントロールに対し有意に増加していた。以上のことから、リゾチームは翻訳段階を促進することによりハイブリドーマやリンパ球の抗体生産性を向上させていることが明らかとなった。リゾチームをFITCを用いて蛍光標識した後、HB4C5細胞に作用させたところリゾチームは細胞内に取り込まれており、その取り込み量は経時的に増加し、抗体産生促進活性の発現と相関していた。これらのことから、リゾチームは細胞内に取り込まれた後、翻訳段階を促進することが明らかとなった。

已经表明，来自鸡蛋白的溶菌酶可促进杂交瘤和淋巴细胞中的抗体产生。因此，在这项研究中，我们进行了研究，目的是阐明作用机理，以阐明溶菌酶如何促进杂交瘤和淋巴细胞的产生。在实验中，使用产生人IgM单克隆抗体的人类杂交瘤HB4C5细胞用于研究溶菌酶对用各种蛋白质合成抑制剂治疗的HB4C5细胞促进抗体产生的作用。结果，溶菌酶表现出针对HB4C5细胞的抗体生产活性，其转录活性被放线肌蛋白D抑制，并且估计作用点是在转录阶段之后的。接下来，当检查对翻译抑制剂环己酰亚胺和氟化钠处理的HB4C5细胞的影响时，通过任何一种翻译抑制剂的处理抑制了活性表达。此外，当分泌抑制剂Monensin抑制抗体的分泌时，溶菌酶表明，与对照相比，细胞中抗体积累的量显着增加。从上面可以揭示出溶菌酶通过促进翻译阶段提高杂交瘤和淋巴细胞的抗体生产率。荧光使用FITC标记溶菌酶后，将溶菌酶应用于HB4C5细胞，并细胞内将溶菌酶的量吸收量，并且其摄取的量随时间增加，与抗体产生促进活性的表达相关。这些发现表明，溶菌酶在细胞中占据后促进了翻译阶段。