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熱変性リゾチームの抗体産生促進活性増強メカニズム解明に関する研究

热变性溶菌酶增强抗体产生促进活性机制的研究

基本信息

批准号：
12760090
负责人：
菅原卓也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究で、ニワトリ卵白由来のリゾチームがヒト型ハイブリドーマや末梢血リンパ球の抗体生産性を促進することを示してきた。また、リゾチームを尿素存在下で熱変性すると、抗体産生促進活性が高まるこが明らかとなった。そこで、様々な条件下で熱処理したリゾチームの抗体産生促進活性の変化を検討した。リゾチームは、分子内に4カ所のジスルフィド結合を有していることから、熱処理における2-メルカプトェタノール(2-ME)の効果を検討した。その結果、2-MEの単独での作用では、熱処理の有無にかかわらず、リゾチームのIPSF活性は消失した。しかし、0.5mMの2-MEと4M尿素との共存下におけるリゾチームの83℃、10分間の熱処理では、そのIPSF活性は飛躍的に上昇し、リゾチーム無添加の場合に対して、ハイブリドーマHB4C5細胞の抗体産生量は77.8倍にまで促進された。また、4M尿素単独存在下での熱処理と比較しても、そのIPSF活性は8.6倍促進された。熱変性リゾチームは、未変性リゾチームと比較してハイブリドーマ細胞内への取り込み量が増大していた。この要因を考察するために、1アニリノナフタレン8スルホン酸を蛍光プローブとして、リゾチーム分子表面の疎水性を比較した。種々の条件での熱変性によるリゾチームの疎水性の変化を解析した結果、リゾチームの疎水性は熱変性の度合いにしたがって増大しており、それはリゾチームのIPSF活性の増大と相関していた。このことから熱変性リゾチームの作用機構を考察すると、リゾチーム分子の塩基性に起因する正荷電による細胞膜表面(負荷電)への静電気的結合がおこり、熱変性で増大した疎水性により細胞膜の脂質二重膜構造を通過しやすくなったことで細胞内への取り込み量が増大したものと考えられ、これにより未変性リゾチームに対して、抗体産生促進効果が増大したのではないかと推察される。

This study is intended to demonstrate the origin of the protein and the promotion of antibody production in the peripheral blood. In the presence of urea, the activity of antibody production promotion is high. Under these conditions, heat treatment promotes antibody production and activity. The effect of heat treatment on the molecular structure and molecular structure of 2-ME is discussed. As a result, the IPSF activity of 2-ME alone disappeared without heat treatment. The IPSF activity of HB4C5 cells increased significantly when the cells were heated at 83℃ for 10 minutes at 0.5 mM 2-ME and 4M urea. The antibody production of HB4C5 cells increased by 77.8 fold when the cells were heated at 83 ℃ for 10 minutes. The IPSF activity was 8.6 times higher than that of the heat treatment in the presence of 4M urea alone. The amount of heat in the cells increases when compared with the amount of heat in the cells. The main reason for this is that the surface water of the molecule is relatively high. The results of the analysis of the thermal properties of the species show that the thermal properties of the species increase and the IPSF activity increases. The mechanism of action of this thermal property is investigated. The effect of antibody production promotion is increasing.