アセチルコリン活性化非選択的カタイオンチャンネルのクローニングと機能発現

乙酰胆碱激活的非选择性阳离子通道的克隆及功能表达

• 批准号: 10770020
• 负责人: 山下 俊一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770020/
• 关键词: アセチルコリン; カタイオンチャンネル; 気管平滑筋; ブタ; クローニング; 気管平滑筋細胞

昨年度は、ブタ気管平滑筋から採取精製したpoly(A)^+RNAによりアフリカツメガエルの卵母細胞上にアセチルコリン活性化非選択的カタイオンチャンネル(Ins-ACh)を再構成できることを確認した。そこで、本年度はまずpoly(A)^+RNAを密度勾配遠心法で分画し、Ins-AChが最大となる分画を得た。この分画からcDNAライブラリーを作製し、E.coliに導入した後、in vitro合成されたmRNAを卵母細胞に注入して観察されるIns-AChの有無を示標にライブラリーのスクリーニングを行った。しかしながら、得られたmRNAではIns-AChが全く確認できない、あるいはスクリーニング中にIns-AChを発現するクローンを見失う等の困難が連続した。その度にcDNAライブラリーを作製し直し、新しいデーター取得解析装置(AXON社DigiPack1200)を導入するなどしてスクリーニングの効率化を図った。Ins-AChを発現するクローンを単離する作業は、実験系を改良しながら現在も継続中である。今後は、得られたcDNAを解析することによりIns-AChの一次構造を決定し、卵母細胞上でキネティクス、Ca^<2+>感受性、チロシンキナーゼ依存性、百日咳毒素感受性について生筋のIns-AChの特性を備えていることを確認してゆく予定である。本研究の成果はCan.J.Physiol.Pharmacol.に発表した。

Last year, poly (A) ^ + RNA (A) ^ + Tubular smooth tendons were selected to confirm that the oocytes were inactivated and unselected. The density of this year's poly (A) ^ + RNA is matched with the center method, and the Ins-ACh maximum is divided. After the cDNA was divided and the E.coli was introduced, the in vitro synthesis mRNA oocyte was injected into the computer to observe that there was no indication that there were any signs of failure. Please make sure that you have lost your connection, such as your Ins-ACh, mRNA, Ins-ACh, and so on. In order to improve the accuracy of the cDNA, the new device (AXON DigiPack1200) is used to obtain the resolution device (DigiPack1200). Ins-ACh has shown that it is necessary to improve the performance of the operation system. In the future, we need to make the decision, the supernatant of the oocyte, the sensitivity of Ca ^ & lt;2+>, the dependence of cDNA, the sensitivity of pertussis toxin, the characteristic of Ins-ACh, the sensitivity of pertussis toxin, and the specificity of pertussis toxin. The achievement of this study is Can.J.Physiol.Pharmacol. Please tell me the table.

项目成果

楢松雅裕: "P_2プリン受容体を介するラット膀胱平滑筋の収縮に関与する細胞内情報伝達系の解析" 日大医学雑誌. 57(5). 263 (1998)

Masahiro Naramatsu：“P_2嘌呤受体介导的大鼠膀胱平滑肌收缩中涉及的细胞内信号转导系统的分析”日本大学医学杂志57（5）（1998）。

Yamashita,T.: "Nonselective cationic currents activated by activated by acetylcholine in swine tracheal smooth muscle cells"Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 77・10. 796-805 (1999)

Yamashita，T.：“猪气管平滑肌细胞中乙酰胆碱激活的非选择性阳离子电流”加拿大生理学和药理学杂志77·10（1999）。