HIV−1のセカンドレセプターとして同定されたTER1／CCR8の解析

TER1/CCR8 分析，被确定为 HIV-1 的第二种受体

• 批准号: 10770129
• 负责人: 神野 厚志
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770129/
• 关键词: TER1; CCR8; セカンドレセプター; HIV-1

我々は、HIV-1変異株に感受性のCD4陽性ヒト脳由来細胞(BT細胞)を分離、維持できる系を確立している。BT細胞は、T細胞株指向性HIV-1株やマクロファージ指向性HIV-1株は感染できないことより、これらのウイルス株の利用するセカンドレセプター(ケモカインレセプター)以外のレセプターがHIV-1変異株の感染に関与していることが推測されていた。そこで、BT細胞へのHIV-1変異株感染に必要なセカンドレセプター(ケモカインレセプター)を同定するために、ケモカインレセプター遺伝子間で保存されている部位のdegenerate primerを用いて、BT細胞のcDNAに対してPCRを行ったところ、TER1/CCR8レセプターが見いだされた。RT-PCR法により、この遺伝子がBT細胞に発現していることと、HIV-1変異株非感受性細胞へのTER1/CCR8遺伝子の導入によって、この細胞が感受性細胞へと変化したことにより、実際にTER1/CCR8がHIV-1変異株のセカンドレセプターとして機能していることが明らかとなった。さらに、TER1/CCR8の細胞外N末端側25アミノ酸より成る合成ペプチドをウサギに免疫後、得られた抗体をペプチドカラムでアフィニティー精製し、この抗体がGSTと融合させたTER1/CCR8タンパク質に特異的に反応することをウエスタン・ブロッテイングにより確認した。現在、この抗体を用いてBT細胞でのTER1/CCR8タンパク質の発現及びHIV-1感染抑制活性について検討中である。

We isolate and maintain the CD4-positive cells from which HIV-1 mutants are susceptible (BT cells). BT cells, T cell line-directed HIV-1 strains, and T cell line-directed HIV-1 strains are presumed to be involved in infection with HIV-1 mutants other than HIV-1 mutants. Therefore, while the necessary base station for HIV-1 variant infection in BT cells is determined, the degenerate primer of the preserved part of the base station gene can be used to perform PCR on the cDNA of BT cells, and the TER1/CCR8 base station has been developed. RT-PCR method for the detection of these genes in BT cells, the introduction of TER1/CCR8 genes into non-susceptible cells of HIV-1 mutants, the transformation of these genes into susceptible cells, and the functional transformation of TER1/CCR8 mutants of HIV-1 mutants. After immunization, the antibody was purified and purified by GST fusion with TER1/CCR8, which is specific for TER1/CCR8. Now, this antibody is used in BT cells to detect the development of TER1/CCR8 protein and HIV-1 infection inhibition activity.