胎盤内皮細胞による未分化造血維持、増幅に関する研究

胎盘内皮细胞维持和扩增未分化造血功能的研究

• 批准号: 10770369
• 负责人: 加藤 陽子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770369/
• 关键词: 胎盤由来内皮細胞; 臍帯血由来造血幹細胞; 骨髄; CD34+; SCID mouse; 胎盤; 内皮細胞; 造血幹細胞; CD34; CD38

平成10年度胎盤由来内皮細胞とその臍帯血由来造血幹細胞を接触させることにより両者の相互作用について検討した。胎盤血および正常骨髄より単核球を分離し、18時間培養する。その後浮遊細胞を除去する。同時に臍帯血由来造血幹細胞を単核球よりCell Pro カラムを用いてCD34+細胞を分離した。胎盤あるいは骨髄接着細胞、培養液のみと臍帯血由来CD34+造血幹細胞を共培養した。3日間培養した後細胞数、CD34+陽性細胞の数を比較したところ、CD34+陽性細胞は胎盤由来内皮細胞上で3.9±1.4倍に増幅されたが細胞数は1.2±0.4倍と変化を認めなかった。一方CD34+陽性細胞は骨髄由来内皮細胞上で1.5±1.4倍に増幅されたが細胞数は10.8±3.6倍と著増した。それぞれの細胞の形態変化をみると、骨髄は造血幹細胞を分化誘導する傾向を示したが、胎盤は分化誘導することなくCD34+陽性細胞を増幅することができた。平成11年度胎盤組織の一部0.5x0.5cmを無菌的に摘出。同時に同胎盤より臍帯血を10ml採取した。胎盤組織をメッシュで濾し、単核細胞を分離した。生後6-8週のSCID mouseに放射線照射し、エーテル麻酔し脾臓に胎盤組織由来細胞と同胎盤由来臍帯血単核球を注入した。4-8週後マウスをsacrificeし、脾臓,肝臓、骨髄より単核球を分離し、フローサイトメトリーでヒト造血幹細胞の割合を比較したところ、CD34+細胞は脾臓と骨髄で認められたが、胎盤組織の有無は生着に関係なかった。

通过接触胎盘来源的内皮细胞与脐带血衍生的造血干细胞来研究两者之间的相互作用。单核细胞与胎盘血和正常的骨髓分离，并培养18小时。然后去除浮动细胞。同时，使用细胞Pro柱将CD34+细胞从单核细胞中分离出来。胎盘或骨髓粘附细胞，仅共培养培养基和脐带血的CD34+造血干细胞。培养3天后，比较了细胞和CD34+阳性细胞的数量。 CD34+阳性细胞在胎盘衍生的内皮细胞上扩增了3.9±1.4倍，但细胞数量为1.2±0.4倍，没有观察到变化。另一方面，CD34+阳性细胞在骨髓来源的内皮细胞上扩增1.5±1.4倍，但细胞的数量显着增加到10.8±3.6倍。从每个细胞的形态变化来看，骨髓显示出诱导造血干细胞分化的趋势，而胎盘能够扩增CD34+阳性细胞而不会诱导分化。 1999年胎盘组织的一部分被0.5x0.5cm无菌去除。同时，从同一胎盘收集了10毫升的脐带血。通过网格过滤胎盘组织，并分离单核细胞。出生后6-8周的SCID小鼠被辐照，麻醉和脐带血单核细胞衍生自胎盘，并注入了同一胎盘。 4-8周后，将小鼠牺牲，从脾脏，肝脏和骨髓中分离单核细胞，并通过流式细胞仪比较人造血干细胞的比例。在脾脏和骨髓中发现CD34+细胞，但胎盘组织的存在或不存在与植入无关。