糖尿病性腎症腎組織における細胞外マトリックス関連蛋白の分子生物学的解析-光学及び電子顕微鏡によるin situ hybridization法を用いて-

糖尿病肾病肾组织中细胞外基质相关蛋白的分子生物学分析 - 使用光学和电子显微镜原位杂交 -

基本信息

  • 批准号:
    10770533
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 1999
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.糖尿病性腎症腎生検組織のメサンギウム領域の定量化昨年度に引き続き、2型糖尿病及び1型糖尿病患者の腎生検組織を電子顕微鏡所見を用いたpoint counting methodによりメサンギウム領域の拡大を客観的に定量化した。2.光学顕微鏡レベルでの各種mRNAと蛋白の発現IV型コラーゲン(α1 chain),MMP-2,3,TIMP-1の各プローブを用いて、非放射性標識法によるin situ hybridization法を継続して行った。mRNAの発現の程度を定量化するため、糸球体一つあたりの総細胞数を数えた後、その糸球体に発現している陽性細胞数を数え、糸球体の総細胞数に対する陽性細胞数の割合を百分率で求めた。求められた百分率とpoint counting methodにより求められたメサンギウム領域の拡大の程度との関係を検討した。その結果、IV型コラーゲン(α1 chain),MMP-2,3,TIMP-1の各mRNAの発現は、メサンギウム領域の拡大の程度とは負の相関を示した。すなわち、糖尿病性腎症のメサンギウム領域の拡大には、IV型コラーゲン(α1 chain)の産生亢進よりは、むしろMMP-2,3,などの細胞外マトリックス蛋白の分解酵素の産生の低下が関与していることが明らかとなった。また、蛋白レベルでの観察を行うために、各種抗体を用いた酵素抗体法を施行した。それぞれの蛋白の発現はmRNAと同様に発現していた。3.電子顕微鏡レベルでのin situ hybridization法凍結切片まで用いて様々な方法で電子顕微鏡レベルでのin situ hybridizationを試みたが、非特異的反応が完全に除去できるような方法は、残念ながら完成せれていない。以上の結果をまとめて、論文を作製中である。
1. Quantification of renal tissue in diabetic kidney disease by electron microscopy in patients with type 2 diabetes and type 1 diabetes mellitus using the point counting method 2. The expression of type IV protein (α1 chain),MMP-2,3 and TIMP-1 in mRNA and protein by optical microscopy was studied by chemical and non-radioactive labeling methods. Quantify the expression of mRNA, count the total number of cells in each sphere, count the number of positive cells in each sphere, and calculate the percentage of positive cells in each sphere. Find the percentage and point counting method to find the relationship between the size of the domain and the size of the domain. The results showed that the mRNA expression of MMP-2,MMP-3,TIMP-1, type IV mRNA (α1 chain),MMP-2 mRNA, MMP-3 mRNA and MMP-1 mRNA were negatively correlated with each other. The increase of MMP-2, MMP-3 and MMP-4 in the production of type IV proteinases in diabetic nephropathy is related to the decrease of MMP-2, MMP-3 and MMP-4 in the production of extracellular proteinases. The enzyme antibody method was used to detect the protein and protein levels. The expression of protein in the protein is similar to that of mRNA. 3. The electronic microscope can be used to freeze slices in situ hybridization, and the non-specific reactions can be completely removed by using the method of using the sample method. The above results are in progress.

项目成果

期刊论文数量(14)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Saotome N: "Immunobistochemical evidence for an increased oxidative stress and carbonyl modification of proteins by autoxidation products of carbohydrates and lipids in glomerular lesion of IgA nephropathy"Nephrology. 5. A10 (1999)
Saotome N:“IgA 肾病肾小球病变中碳水化合物和脂质的自氧化产物增加了氧化应激和蛋白质羰基修饰的免疫生物化学证据”。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Suzuki D: "Immunohistochemical evidence for an increased oxidative stress and carbonyl modification of proteins in diabetic glomerular lesions" J Am Soc Nephrol. (in press).
Suzuki D:“糖尿病肾小球病变中蛋白质氧化应激和羰基修饰增加的免疫组织化学证据”J Am Soc Nephrol。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yokoyama H: "Serum and urinary concentration of heparan sulfate in patients with diabetic nephropathy"Kidney Int. 56. 650-658 (1999)
Yokoyama H:“糖尿病肾病患者的血清和尿硫酸乙酰肝素浓度”Kidney Int。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
鈴木大輔: "糖尿病性腎症" 南江堂, 213 (1998)
铃木大辅:“糖尿病肾病” Nankodo,213(1998)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
鈴木大輔: "専門医のための糖尿病レビュー'98-'99" 総合医学社, 159 (1998)
铃木大辅:“98-99 年专家糖尿病回顾”Sogo Igakusha,159 (1998)
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  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • 资助金额:
    $ 1.22万
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