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各種腎疾患におけるメサンギラム細胞高発現遺伝子(megsin)のmRNAおよび蛋白発現の組織学的解析

各种肾脏疾病中系膜细胞高表达基因（megsin）mRNA及蛋白表达的组织学分析

基本信息

批准号：
12770595
负责人：
鈴木大輔
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770595/
关键词：
megsin in situ hybridization法糖尿病性腎症 IgA腎症糖尿病性腎病

项目摘要

1.各種腎組織のメサンギウム領域の定量化昨年度に引き続き、各種腎組織でのメサンギウム領域の定量を我々が最近開発した画像解析ソフトを用いて、自動画像解析装置[KS300]にて行った。その結果、IgA腎症や非IgA増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症では膜性腎症や微小変化型ネフローゼ症候群の腎組織に比較して、明らかなメサンギウム領域の拡大が認められた。2.光学顕微鏡レベルでのin situ hybridization法megsinのプローブを用いて、非放射性標識法によるin situ hybridization法を行った。各種腎組織ともmegsin mRNAの発現は、糸球体を中心に認められ、特にメサンギウム細胞の局在と一致していた。mRNAの発現の程度を定量化する目的で自動画像解析装置を用いたが、逆に主観が入ることが多かったため、糸球体全体の総細胞数を数え、次に糸球体内での陽性細胞数を数えることにより、糸球体全体の総細胞数に対する百分率で陽性細胞の割合を算出した。その結果、mRNAの発現はIgA腎症や糖尿病性腎症で強く認められた。3.megsin抗体を用いた免疫組織染色昨年度と同様に我々が作成したポリクローナル抗megsin抗体を用いて各種腎組織に免疫組織染色を行った。その結果、ポリクローナル抗megsin抗体は各種腎疾患とも糸球体を中心に染色され、その局在は特にメサンギウム領域に限局していた。蛋白レベルでの発現の程度は、IgA腎症や非IgA増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症で膜性腎症や微小変化型ネフローゼ症候群の腎組織に比較して増加していた。4.megsin蛋白の抗体作製今年度は3で用いた抗体とは別に、数種類のモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の作成に成功した。この新たに作成した抗体については、学術英文誌(Biochem Biophys Res Commun)に掲載された。

1. Quantification of various kidney tissues in the field of kidney tissue analysis, quantification of various kidney tissues in the field of kidney tissue analysis, application of image analysis software, automatic image analysis device [KS300] The results showed that IgA nephropathy, non-IgA proliferative glomerulonephritis, diabetic nephropathy, membranous nephropathy, and microdegenerative nephropathy were significantly different from those in the control group. 2. Optical microscopy is used to detect the presence and absence of radioactivity in situ hybridization. The expression of megsin mRNA in various kidney tissues is consistent with that in the central part of the body. To quantify the level of mRNA expression, an automatic profile analyzer was used to calculate the number of cells in the total number of cells in the sphere, the number of positive cells in the total number of cells in the secondary sphere, and the percentage of positive cells in the total number of cells in the sphere. The results and mRNA expression are strongly recognized in IgA kidney disease and diabetic kidney disease. 3. Megsin antibodies were used for immunostaining of various kidney tissues. The results showed that anti-megsin antibodies were found in the center of various kidney diseases and in the center of the body. The degree of protein expression increased in IgA nephropathy, non-IgA proliferative glomerulonephritis, diabetic nephropathy, membranous nephropathy, and microdegenerative renal syndrome. 4. Megsin protein antibody production This year, the production of several kinds of megsin protein antibody was successful. This new antibody was published in Biochem Biophys Res Commun.