耳下腺腺房細胞の開口分泌におけるADPリボシレーション因子(Arf)の関与

ADP 核糖基化因子 (Arf) 参与腮腺腺泡细胞的胞吐作用

• 批准号: 12771113
• 负责人: 道家 洋子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771113/
• 关键词: 耳下腺; Arf1; ホスホリパーゼD; 開口放出

本研究の目的は、cAMP依存性の開口放出におけるArf1の役割を明らかにすることであった。Arf1の下流にあるものとしてリン脂質酵素の一つであるホスホリパーゼD(PLD)活性が、ラット耳下腺腺房細胞に存在するかどうか確認した。耳下腺腺房細胞をホモジネイトし、ライセイトを調製した。PLD活性は、[^3H]ホスファチジルコリンから分解される[^3H]コリン量を測定した。ラット耳下腺腺房細胞にGTPgS依存性PLD活性が確認された。これは、低分子量GTP結合タンパク質依存性のPLD活性の存在を示している。また、ホスファチジルイノシトール(4,5)2リン酸(PIP_2)の依存性も確認された。私たちは、Arf1のN末ペプチドがcAMP依存性のアミラーゼ開口分泌が抑制されることを明らかにしてる。そこで、同一のペプチドを用いて、GTPgSおよびPIP_2依存性のPLD活性に対する影響について実験を行った。Arf1は、N末にミリスチル化という脂質修飾がされている。実験の結果、40mMのミリスチル化されたペプチド(myr-Arf1ペプチド)は、37℃15分のインキュベートでGTPgS依存性のPLD活性をほぼ80%抑制した。しかし、ミリスチル化されていないArf1のN末ペプチドや配列が全く逆のArf1のN末ペプチドは、myr-Arf1ペプチドに比べ抑制効果は著しく小さかった。これらの結果は、GTPgS依存性のPLD活性にArf1が大きく関与していることを示している。膜の輸送にリン脂質代謝は大きく関与しており、Arf1は、ラット耳下腺腺房細胞において、脂質代謝を制御するPLD活性を通して、アミラーゼの開口放出を制御してい可能性があることが示唆された。

这项研究的目的是阐明ARF1在CAMP依赖性开放释放中的作用。已经证实，磷脂酶D（PLD）活性（一种磷脂酶之一，ARF1的下游）是否存在于大鼠腮腺腺泡细胞中。将腮腺细胞匀浆以制备裂解液。测量了从[^3H]磷脂酰胆碱分解的[^3H]胆碱的量。 GTPGS依赖性的PLD活性在大鼠腮腺细胞中得到了证实。这表明存在低分子量GTP结合蛋白依赖性PLD活性。此外，还确认了磷脂酰肌醇（4,5）（PIP_2）的依赖性。我们已经表明，ARF1的N末端肽抑制了CAMP依赖性淀粉酶的开放分泌。因此，进行了实验以确定使用相同肽的GTPG和PIP_2依赖性PLD活性的影响。 ARF1在N端称为Myristylation时被脂质修饰。实验表明，40 mM肉豆蔻酰化的肽（MyR-ARF1肽）在37°C时在15分钟孵育时抑制了GTPGS依赖性PLD活性近80％。然而，具有完全相反序列的ARF1的非膜化N末端肽和ARF1的N末端肽的抑制作用明显低于MYR-ARF1肽。这些结果表明，ARF1与GTPGS依赖性PLD活性大量参与。磷脂代谢很大程度上参与了膜转运，这表明ARF1可以通过PLD活性调节淀粉酶开放释放，PLD活性调节大鼠羊毛细胞细胞中的脂质代谢。