耳下腺腺房細胞の開口分泌におけるADPリボシレーション因子(Arf)の関与

ADP 核糖基化因子 (Arf) 参与腮腺腺泡细胞的胞吐作用

• 批准号: 12771113
• 负责人: 道家 洋子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771113/
• 关键词: 耳下腺; Arf1; ホスホリパーゼD; 開口放出

本研究の目的は、cAMP依存性の開口放出におけるArf1の役割を明らかにすることであった。Arf1の下流にあるものとしてリン脂質酵素の一つであるホスホリパーゼD(PLD)活性が、ラット耳下腺腺房細胞に存在するかどうか確認した。耳下腺腺房細胞をホモジネイトし、ライセイトを調製した。PLD活性は、[^3H]ホスファチジルコリンから分解される[^3H]コリン量を測定した。ラット耳下腺腺房細胞にGTPgS依存性PLD活性が確認された。これは、低分子量GTP結合タンパク質依存性のPLD活性の存在を示している。また、ホスファチジルイノシトール(4,5)2リン酸(PIP_2)の依存性も確認された。私たちは、Arf1のN末ペプチドがcAMP依存性のアミラーゼ開口分泌が抑制されることを明らかにしてる。そこで、同一のペプチドを用いて、GTPgSおよびPIP_2依存性のPLD活性に対する影響について実験を行った。Arf1は、N末にミリスチル化という脂質修飾がされている。実験の結果、40mMのミリスチル化されたペプチド(myr-Arf1ペプチド)は、37℃15分のインキュベートでGTPgS依存性のPLD活性をほぼ80%抑制した。しかし、ミリスチル化されていないArf1のN末ペプチドや配列が全く逆のArf1のN末ペプチドは、myr-Arf1ペプチドに比べ抑制効果は著しく小さかった。これらの結果は、GTPgS依存性のPLD活性にArf1が大きく関与していることを示している。膜の輸送にリン脂質代謝は大きく関与しており、Arf1は、ラット耳下腺腺房細胞において、脂質代謝を制御するPLD活性を通して、アミラーゼの開口放出を制御してい可能性があることが示唆された。

The purpose of this study is to clarify the cAMP dependent release of Arf1. Arf1 is a lipid enzyme that is present in the lower part of the ear gland and is active in D(PLD). Ear gland cells are modulated. PLD activity was measured by UV spectrophotometry. GTPgS-dependent PLD activity was confirmed in salivary gland cells. The presence of substance-dependent PLD activity in low molecular weight GTP binding proteins was also demonstrated. The dependency of acid (PIP_2) on the protein (4, 5) was confirmed. Arf1 and Arf 2 are cAMP-dependent. The effect of PLD activity on GTPgS and PIP_2 dependency is discussed in detail. Arf1, N terminal, lipid modification, etc. As a result, the activity of PLD dependent on GTPgS was inhibited by 80% at 37℃ for 15 minutes at 40mM myr-Arf1. Arf1's N-terminal selection is matched with all reverse Arf1's N-terminal selection, myr-Arf1's N-terminal selection and myr-Arf1's N-terminal selection. As a result, GTPgS-dependent PLD activity was found in Arf1. Membrane transport, lipid metabolism, regulation of PLD activity, regulation of lipid metabolism, and the possibility of regulation of lipid release are discussed.