ルシゲニン化学発光によるビスフェノールAの高感度酵素免疫測定法

使用光泽精化学发光法对双酚 A 进行高灵敏酶免疫分析

• 批准号: 12771385
• 负责人: 小門 周
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771385/
• 关键词: ビスフェノールA; ルシゲニン; 酵素免疫測定法; 内分泌かく乱化学物質; 化学発光法

平成13年度は主としてビスフェノールA(BPA)の測定法について検討し、実際に生体試料中あるいは実験器具から溶出するのBPA濃度の定量を行った。1.ハプテンと標識抗原の組み合わせの最適化側鎖の異なる3種のカルボン酸誘導体を調製し、キャリヤータンパクとしてBSAを用い免疫源を調製し抗血清を得た。同様にALP標識BPAを3種調製し、これらを用い全ての組み合わせにおける測定の感度および特異性を詳細に検討し、化学発光検出酵素免疫測定法を構築した。BPAは0.06-100ng/mLの範囲で定量でき、精度は平均5.4%と良好であった。検出限界は0.06ng/mLであり4-ニトロフェニルリン酸を用いる比色法でALP活性を検出する方法に比べて約5倍高感度であった。2.生体試料中のビスフェノールA濃度の測定本法を用いて、ヒト血清中のBPA濃度を測定する目的で希釈直線性試験及び添加回収試験を行った。5種の検体において10倍以上の希釈率で良好な希釈直線性が得られ、1アッセイあたりの血清必要最低量は5μLであった。さらに、ヒト血清試料にそれぞれ、既知濃度のBPAを添加し、添加回収試験を行ったところ、平均添加回収率は100.9±11.4(mean±SD)%と良好であり、ヒト血清中のBPA濃度を測定できることが確認できたので、健常人を含む種々の血清中BPA濃度を測定した。3.環境中のビスフェノールA濃度の測定BPAを主原料としないポリカーボネートやエポキシ樹脂以外の材質であるプラスチック製の実験器具を使用する場合でも、BPAが溶出し測定系を汚染してしまうことが懸念される。そこでポリプロピレンやポリスチレンを材質とする実験器具から溶出するBPAを測定した。食品衛生試験法のポリカーボネートを主成分とする合成樹脂製の器具又は容器包装の溶出試験に準じて溶出試験を行った。浸出液を水として試験した結果、2つの試料で極微量のBPAが溶出した。これらの器具を用いBPAの定量をする場合BPAの溶出が起こる可能性が示唆された。

In 2013, the concentration of BPA in biological samples was determined by the method of determination of BPA (BPA). 1. To optimize the combination of antigen and antigen, three kinds of acid inducers were prepared by using BSA as immunogen and antiserum was prepared. The sensitivity and specificity of BPA assay were discussed in detail. BPA was quantified in the range of 0.06-100ng/mL, with an average accuracy of 5.4%. The detection limit is 0.06ng/mL, and the sensitivity of ALP activity is about 5 times higher than that of ALP activity by colorimetry. 2. Determination of BPA Concentration in Biological Samples This method was used to determine BPA concentration in serum. 5 kinds of serum samples were collected at a rate of 10 times or more. In addition, the serum samples were tested for BPA with known concentrations, and the average recovery rate was 100.9±11.4(mean±SD)%. The serum BPA concentration was determined. 3. The determination of BPA concentration in the environment is A matter of concern for the use of BPA dissolution instruments for materials other than resins. The dissolution of BPA by the instrument Food hygiene test method for the main components of synthetic resin appliances and container packaging for dissolution test The leaching solution was diluted with water, and the amount of BPA dissolved from the sample was 2%. The possibility of dissolution of BPA in the presence of BPA quantification in these instruments is demonstrated.

项目成果

Amane Kokado, Hidetoshi Arakawa, Masako Maeda: "Chemiluminescent assay of alkaline phosphatase using dihydroxyacetone phosphate as substrate detected with lucigenin"Luminescence. 17. 5-10 (2002)

Amane Kokado、Hidetoshi Arakawa、Masako Maeda：“使用磷酸二羟丙酮作为用光泽精检测的底物进行碱性磷酸酶的化学发光测定”发光。