ミオシンリン酸化を介した情報伝達系におけるZIPキナーゼの役割解明に関する研究

野生型及び不活性型ZIPキナーゼの細胞導入用コンストラクトを作成し、それぞれ培養細胞に導入したところ、以下のような知見を得ることができた。1.野生型及び不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞を免疫沈澱法により回収し、試験管内でミオシンリン酸化活性を調べたところ、野生型にはミオシンを2重リン酸化(19番目のセリン及び18番目のスレオニンの二か所がリン酸化)する活性が見られたが、不活性型には見られなかった。2.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞を2重リン酸化ミオシンを特異的に認識する抗体で蛍光抗体法により観察すると、2重リン酸化ミオシンが著しく増加していることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。3.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞では、アクチン繊維の再構築が引き起こされていることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。これらのことから、ZIPキナーゼは細胞内でミオシンの2重リン酸化を誘導することができること、さらに2重リン酸化ミオシンがアクチン繊維の構築に重要な役割を果たしていることを明らかにした。本研究成果は現在国際誌に投稿中である。

野生型及び不活性型ZIPキナーゼの細胞導入用コンストラクトを作成し、それぞれ培養細胞に導入したところ、以下のような知見を得ることができた。1.野生型及び不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞を免疫沈澱法により回収し、試験管内でミオシンリン酸化活性を調べたところ、野生型にはミオシンを2重リン酸化(19番目のセリン及び18番目のスレオニンの二か所がリン酸化)する活性が見られたが、不活性型には見られなかった。2.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞を2重リン酸化ミオシンを特異的に認識する抗体で蛍光抗体法により観察すると、2重リン酸化ミオシンが著しく増加していることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。3.野生型ZIPキナーゼを導入した細胞では、アクチン繊維の再構築が引き起こされていることが分かった。しかし、不活性型ZIPキナーゼを導入した細胞では上記のような現象は見られなかった。これらのことから、ZIPキナーゼは細胞内でミオシンの2重リン酸化を誘導することができること、さらに2重リン酸化ミオシンがアクチン繊維の構築に重要な役割を果たしていることを明らかにした。本研究成果は現在国際誌に投稿中である。