マウス受精卵における時期特異的ポリ(A)鎖伸長母性RNA群の系統的解明

系统阐明小鼠受精卵中阶段特异性 Poly(A) 链延伸母体 RNA 基团

• 批准号: 12780562
• 负责人: 桜井 敬之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780562/
• 关键词: マウス; 着床前初期胚; 卵形成; 受精卵; 母性RNA; 接合型遺伝子発現; poly(A)鎖付加; 翻訳制御; poly(A)化

マウス初期胚では、蓄積されていた母性RNA群から、受精後、新たに転写された接合体型RNAへの遺伝情報発現の変換は受精後20時間頃に生じる。この時期に対応する新たな現象として、我々は、ある母性RNAが受精後18時間(1細胞期後期)をピークとして一過的にそのmRNAのポリ(A)鎖を伸長させ、その後分解されることを初めて見いだした。現在、我々の他に7遺伝子で同様の現象が報告されており、受精後に生じる母性RNAのポリ(A)鎖伸長現象が、マウス初期胚発生プログラム発動に重要な役割を演じている可能性が示唆されている。我々は、この現象を系統的解明するため、独自に考案したポリA鎖伸長を起こした母性RNA群のみを濃縮したcDNALibraryの作製を試み、その解析を目指している。本年度は、昨年検討した条件をさらに最適化し、マウス初期胚にATP誘導体を取り込ませポリ(A)鎖伸長を引き起こしている母性RNAのみを濃縮したcDNA群の増幅に成功した。具体的には、受精後5時間の卵(α-amanitin処理済み)の細胞質に、10mMBiotin-ATPを2-5pl顕微注入した。Biotin-ATP注入受精卵は、再度、3-4時間培養した。その後、我々が確立した方法でbiotinラベルRNA群を単離し、RT-PCRを用いてcDNA Libraryの作製に必要十分な量のcDNAを増幅した。このcDNAがマウス受精後ポリ(A)鎖伸長を示すRNA群を濃縮しているか否かを検討するために、受精後ポリ(A)鎖を伸長することが現在までに報告された遺伝子8つ、および伸長を示さない遺伝子3つにつきPCRによって検討し、期待したとおりにポリ(A)鎖を伸長する遺伝子のみにPCR産物の増幅が確認できた。現在、PCR-based cDNA Libraryの完成を目指している。

In the early stage of pregnancy, the maternal RNA group of pregnant women was pregnant, and after fertilization, the conjugate type of RNA was detected at 20 hours after insemination. After 18 hours of fertilization (1 cell period), the aging mRNA cycle (A) of maternal RNA after fertilization was increased, and then was decomposed. At present, our parents are interested in the same situation as the report, maternal RNA pregnancy (A) after insemination, and the possibility of important service cutting performances in the early stages of pregnancy. We are responsible for the interpretation of the system, the independent examination system, the maternal RNA group, the cDNALibrary group, and the target group. This year and last year, this year and last year, in the current year and last year, the conditions of this year and last year have been improved, and the early stage of the embryo ATP has been selected. The elongation (A) has led to the success of the maternal RNA population. Specific oocytes, 5 hours after fertilization (α-amanitin) and 10mMBiotin-ATP-2-5pl were microinjected into the cells. Biotin-ATP was injected into the fertilized egg and cultured again for 3-4 hours. After the application, we will make sure that the method is biotin, the RNA group is isolated, and RT-PCR uses the cDNA Library to make sure that it is necessary to measure the cDNA size. After fertilization, the (A) elongation indicates that the RNA population has no effect on whether or not the RNA population has been successfully fertilized. After the fertilization, the (A) has been shown to have an elongation (A). Now, the report has an increase of 8 percent, and the elongation indicates that the child 3 days after fertilization is not affected by PCR. We expect you to make sure that you can make sure that you have a large number of PCR devices. Now, PCR-based cDNA Library has completed the goal.

项目成果

Huang Z,Tamura M,Sakurai T et al: "In vivo transfection of testicular germ cells and transgenesis by using the mitochondrially localized jellyfish fluorescent protein gene."FEBS Lett.. 487(2). 248-251 (2000)

Huang Z、Tamura M、Sakurai T 等：“利用线粒体定位的水母荧光蛋白基因进行睾丸生殖细胞的体内转染和转基因。”FEBS Lett.. 487(2)。

Kajiwara, K., O-Wang, J., Sakurai, T. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells. 6. 99-106 (2001)

Kajiwara, K.、O-Wang, J.、Sakurai, T. 等人：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells。

Kajiwara,K.,O-Wang,J.,Sakurai,T. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells in press (2001).

梶原K.、O-Wang,J.、樱井T.