マウス受精卵における時期特異的ポリ(A)鎖伸長母性RNA群の系統的解明
マウス受精卵における時期特異的ポリ(A)鎖伸長母性RNA群の系統的解明
系统阐明小鼠受精卵中阶段特异性 Poly(A) 链延伸母体 RNA 基团
批准号：
12780562
负责人：
桜井 敬之
金额：
$1.34万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2000 至 2001
中文摘要
翻译
マウス初期胚では、蓄積されていた母性RNA群から、受精後、新たに転写された接合体型RNAへの遺伝情報発現の変換は受精後20時間頃に生じる。この時期に対応する新たな現象として、我々は、ある母性RNAが受精後18時間(1細胞期後期)をピークとして一過的にそのmRNAのポリ(A)鎖を伸長させ、その後分解されることを初めて見いだした。現在、我々の他に7遺伝子で同様の現象が報告されており、受精後に生じる母性RNAのポリ(A)鎖伸長現象が、マウス初期胚発生プログラム発動に重要な役割を演じている可能性が示唆されている。我々は、この現象を系統的解明するため、独自に考案したポリA鎖伸長を起こした母性RNA群のみを濃縮したcDNALibraryの作製を試み、その解析を目指している。本年度は、昨年検討した条件をさらに最適化し、マウス初期胚にATP誘導体を取り込ませポリ(A)鎖伸長を引き起こしている母性RNAのみを濃縮したcDNA群の増幅に成功した。具体的には、受精後5時間の卵(α-amanitin処理済み)の細胞質に、10mMBiotin-ATPを2-5pl顕微注入した。Biotin-ATP注入受精卵は、再度、3-4時間培養した。その後、我々が確立した方法でbiotinラベルRNA群を単離し、RT-PCRを用いてcDNA Libraryの作製に必要十分な量のcDNAを増幅した。このcDNAがマウス受精後ポリ(A)鎖伸長を示すRNA群を濃縮しているか否かを検討するために、受精後ポリ(A)鎖を伸長することが現在までに報告された遺伝子8つ、および伸長を示さない遺伝子3つにつきPCRによって検討し、期待したとおりにポリ(A)鎖を伸長する遺伝子のみにPCR産物の増幅が確認できた。現在、PCR-based cDNA Libraryの完成を目指している。
英文摘要
マウス初期胚では、蓄積されていた母性RNA群から、受精後、新たに転写された接合体型RNAへの遺伝情報発現の変換は受精後20時間頃に生じる。この時期に対応する新たな現象として、我々は、ある母性RNAが受精後18時間(1細胞期後期)をピークとして一過的にそのmRNAのポリ(A)鎖を伸長させ、その後分解されることを初めて見いだした。現在、我々の他に7遺伝子で同様の現象が報告されており、受精後に生じる母性RNAのポリ(A)鎖伸長現象が、マウス初期胚発生プログラム発動に重要な役割を演じている可能性が示唆されている。我々は、この現象を系統的解明するため、独自に考案したポリA鎖伸長を起こした母性RNA群のみを濃縮したcDNALibraryの作製を試み、その解析を目指している。本年度は、昨年検討した条件をさらに最適化し、マウス初期胚にATP誘導体を取り込ませポリ(A)鎖伸長を引き起こしている母性RNAのみを濃縮したcDNA群の増幅に成功した。具体的には、受精後5時間の卵(α-amanitin処理済み)の細胞質に、10mMBiotin-ATPを2-5pl顕微注入した。Biotin-ATP注入受精卵は、再度、3-4時間培養した。その後、我々が確立した方法でbiotinラベルRNA群を単離し、RT-PCRを用いてcDNA Libraryの作製に必要十分な量のcDNAを増幅した。このcDNAがマウス受精後ポリ(A)鎖伸長を示すRNA群を濃縮しているか否かを検討するために、受精後ポリ(A)鎖を伸長することが現在までに報告された遺伝子8つ、および伸長を示さない遺伝子3つにつきPCRによって検討し、期待したとおりにポリ(A)鎖を伸長する遺伝子のみにPCR産物の増幅が確認できた。現在、PCR-based cDNA Libraryの完成を目指している。
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Huang Z,Tamura M,Sakurai T et al: "In vivo transfection of testicular germ cells and transgenesis by using the mitochondrially localized jellyfish fluorescent protein gene."FEBS Lett.. 487(2). 248-251 (2000)
Huang Z、Tamura M、Sakurai T 等：“利用线粒体定位的水母荧光蛋白基因进行睾丸生殖细胞的体内转染和转基因。”FEBS Lett.. 487(2)。
Huang Z、Tamura M、Sakurai T 等：“利用线粒体定位的水母荧光蛋白基因进行睾丸生殖细胞的体内转染和转基因。”FEBS Lett.. 487(2)。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
Kajiwara, K., O-Wang, J., Sakurai, T. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells. 6. 99-106 (2001)
Kajiwara, K.、O-Wang, J.、Sakurai, T. 等人：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells。
Kajiwara, K.、O-Wang, J.、Sakurai, T. 等人：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
Kajiwara,K.,O-Wang,J.,Sakurai,T. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells in press (2001).
梶原K.、O-Wang,J.、樱井T.
梶原K.、O-Wang,J.、樱井T.
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
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