レンズ由来の軸索伸長反発因子の同定

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私はニワトリ6日目胚の網膜組織片とレンズを並べてコラーゲンゲル中で培養すると、レンズ側に向かって伸びる軸索の伸長が著しく抑えられることから、レンズは網膜内における極めて初期の軸索伸長に関与していることを明らかにした。レンズ由来の軸索伸長反発因子を同定するために、レンズ由来の反発分子が分泌型であることに注目して、酵母変異株を用いたsignal sequence trap法(Klein et al.,1996)を採用した。レンズ由来の軸索伸長に対する反発活性はレンズ上皮に局在するので、レンズ由来のcDNAライブラリーをスクリーニングし、レンズ上皮に特異的に発現する4つの新規分泌型タンパク質の全長cDNAの配列を決定した(clone 1,clone 15-2,clone 15-7,clone 179)。軸索伸長反発活性を検討するためにCOS細胞に各々のcDNAを導入し、Hanging drop法を用いて細胞塊を作成して、網膜組織片と共培養したが網膜神経繊線維の伸長に反発活性を示す分子はなかった。しかしながら、クローニングした分子は以下の機能を持つことが明らかになった。Clone 1;眼胞が形成される時期に網膜色素上皮細胞の一部とレンズ上皮細胞に発現が見られ、眼の形態形成に関与している。Clone 15-2 ＆ clone 15-7;レンズの赤道上領域に発現が見られることからEquarinと命名し、クリスタリンの発現を異所的に誘導することが明らかになった。Clone 179;眼の形態形成と形づくりにおいて前-背側誘導活性を持ち、新規BMPアンタゴニストであることが判明した。