新規カプシドを用いたAAVベクター効率的作製法確立と記憶学習制御

利用新型衣壳和记忆学习控制建立高效的 AAV 载体生产方法

• 批准号: 17H00597
• 负责人: 岡村 理子
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00597/
• 关键词: アデノ随伴ウィルス; Sf9細胞

アデノ随伴ウィルス(AAV : adeno-associated virus)ベクターは、非病原性ウィルスで、かつ、神経細胞などの非分裂細胞に効率よく遺伝子導入できるため、非常に有用性が高いベクターである。また、AAVには、多くの血清型があり、その型により組織特異性が存在する。最近、多種の血清型を組み合わせたハイブリッドカプシドが開発された。これを用いて作製されたAAV2/DJは、様々な細胞・組織に高効率で遺伝子導入できることが知られている。当研究室では、これまで、血清型1型(AAV2/1)についてSf9細胞にて大量産生する系を構築した。そこで、今回、ハイブリッド血清型DJ(AAV2/DJ)他についても、Sf9系を駆使した、安価で簡便な高力価ウィルスの作出法の検討を行い、神経機能を高効率で操作するツールの開発をめざした。まず、新規AAVカプシドのAAV2/DJ、AAV2/2retroについて、Sf9細胞でAAVベクター作製に必要なコンポーネント(カプシドとAAV2複製酵素)を発現させるため、これらのバキュロウィルスを作成した。特に、カプシド3種類(VP1、VP2、VP3)の発現を1つのmRNA上で行うために、最適な開始コドン付近の配列を検討した。またこの時、1種類のバキュロウィルス上で、カプシドと複製酵素を発現させるデュアルカセットの系を用いた。続いて、目的遺伝子を含むバキュロウィルスとの二重感染の割合、及び精製方法を検討し、作製に成功した。次に、作製したウィルスをマウス脳への導入し、発現の確認と発現部位の検討を行った。

ア デ ノ with accompanying ウ ィ ル ス (AAV: adeno - associated virus get) ベ ク タ ー は, avirulence ウ ィ ル ス で, か つ, god 経 cell な ど の not splinter cell に sharper rate よ く posthumous son 伝 import で き る た め, very に usefulness が high い ベ ク タ ー で あ る. The presence of また, AAVに に, multiple く <s:1> serotypes があ and そ <s:1> types によ and tissue-specific が is する. Recently, multiple <s:1> serotypes を groups み combined with わせたハ ブリッドカプシドが ブリッドカプシドが developed された. こ れ を with い て cropping さ れ た AAV2 / DJ は, others 々 な traces of cells, tissues, に high rate of unseen で 伝 son import で き る こ と が know ら れ て い る. When a large number of で た, <s:1> れまで, and serotype 1 (AAV2/1)に を て てSf9 cells in the laboratory にて produce する lines を to construct た. そ こ で, today back, ハ イ ブ リ ッ ド serotype DJ (AAV2 / DJ) he に つ い て も, Sf9 を 駆 make し た, Ann 価 で simple な colliers 価 ウ ィ ル ス の make method の 検 line for を い, god 経 functional を high working rate で す operation る ツ ー ル の open 発 を め ざ し た. ま ず, new rules AAV カ プ シ ド の AAV2 / DJ, AAV2/2 retro に つ い て, Sf9 cells で AAV ベ ク タ ー cropping に necessary な コ ン ポ ー ネ ン ト (カ プ シ ド と AAV2 replication enzymes) を 発 now さ せ る た め, こ れ ら の バ キ ュ ロ ウ ィ ル ス を made し た. に, カ プ シ ド 3 types (VP1, VP2 and VP3) の 発 を now 1 つ の mRNA on line で う た め に, optimum な began コ ド ン paying nearly の match column を beg し 検 た. When ま た こ の, 1 species の バ キ ュ ロ ウ ィ ル ス で, カ プ シ ド と replication enzyme を 発 now さ せ る デ ュ ア ル カ セ ッ ト の is を with い た. 続 い て, purpose but 伝 を containing む バ キ ュ ロ ウ ィ ル ス と の の cut, double infection and び refined methods を beg し 検, cropping に successful し た. This time, に, make たウィ たウィ スを スを ウス脳へ ウス脳へ <s:1> import に, occurrence った confirm the と occurrence part 検 discuss を line った.

项目成果

Deciphering Ca2+-dependent signaling pathways underlying cognitive processes.

破译认知过程背后的 Ca2 依赖性信号通路。

• 发表时间: 2018
• 作者: Bito H. Kim R;Inoue M;Inokuchi K;Yokoyama T;Sakai K;Miyazawa Y;Ishii Y;Okamura M;Gammon N;Kobari S;Kondo Y;Sakamoto M;Fujii H.
• 通讯作者: Fujii H.