着床前診断における、簡便で安価なバイオプシー技術の開発

开发用于植入前诊断的简单且廉价的活检技术

• 批准号: 17H00623
• 负责人: 児島 輝仁
• 金额: $ 0.33万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00623/
• 关键词: 体外受精; 胚盤胞; 遺伝病

研究目的 : 近年、重篤な遺伝性疾患の伝播を回避するため、着床前診断(Preimplantation Genetic Diagnosis : PGD)が実施されるようになった。主にレーザーを用いて、胚盤胞期胚の将来胎盤となる栄養外胚細胞(trophectoderm : TE)を採取することにより行われる。しかし、レーザーは高価である上、発熱による胚へのダメージの可能性も否定できない。そこで本研究では安全で簡便に行えるバイオプシー法を開発することを目的とした。研究方法 : 実験に用いる胚盤胞期胚は、7週齢雌マウス(BDF1)に過剰排卵処理を行い、10-15週齢の成熟雄マウス(ICR)と体外受精後、4日間培養することにより作成した。以下の3種の方法でバイオプシーを行った。A)胚盤胞腔液(blastocoel fluid : BF)をマイクロマニブレーターに取り付けたピペットにより吸引する。B)孵化のため透明帯から部分的に脱出したTEの一部分を20μmピペットで吸引し、ホールディングピペットとの物理的擦過により分離する。C)透明帯から部分的に脱出したTE部分をマイクロブレードで切断する。以上の方法で採取したサンブルを用いて、PCRによる胚の性判別を実施した。各実験群におけるサンブル回収率、性別判定成功率、翌日の胚の生存率を算出した。研究成果 : A法によるサンブル回収率は75.0%(6/8)、性別判定成功率は33.3%(2/6)、胚の生存率は100%(8/8)であった。B法によるサンプル回収率は50.0%(5/10)、性別判定成功率は20.0%(1/5)、胚の生存率は90.0%(9/10)であった。C法では、サンプル回収率は81.25%(13/16)、性別判定成功率は84.62%(11/13)、胚の生存率は81.25%(13/16)であった。A法では胚の生存率は高かったが、性別判定成功率は低かった。B法ではサンブル回収率と性別判定成功率がともに低かった。C法はサンブル回収率、性別判定成功率、胚の生存率いずれも80%以上で性別判定成功率はA法、B法と比較し有意に高率であった(p<0.05)。以上の結果より、今後C法に改善を加えヒトヘの応用を目指したいと考えている。

Objective: In recent years, preimplantation Genetic diagnosis (PGD) has been carried out to avoid the spread of serious genetic diseases. The embryo of the embryo stage of the embryo stage The possibility of a possible divorce is denied. The purpose of this study is to simplify the process of development. Methods: Embryos at blastocyst stage, 7 weeks old female embryos (BDF1), ovulation treatment, 10-15 weeks old mature male embryos (ICR), in vitro fertilization, 4 days of culture were used. There are three ways to do this: A) Blastocoel fluid (BF) is a fluid that attracts a person. B) Incubation of the transparent zone part of the separation of the TE part of the 20μm attraction, the separation of the physical wipe C) The transparent part of the band is removed from the TE part. The above methods are applied to the identification of DNA by PCR. For each group, the recovery rate, the success rate of sex determination, and the survival rate of embryos the next day were calculated. The results showed that the recovery rate of A method was 75.0%(6/8), the success rate of sex determination was 33.3%(2/6), and the survival rate of embryos was 100%(8/8). The recovery rate of B method was 50.0%(5/10), the success rate of sex determination was 20.0%(1/5), and the survival rate of embryos was 90.0%(9/10). The recovery rate of C method was 81.25%(13/16), the success rate of sex determination was 84.62%(11/13), and the survival rate of embryos was 81.25%(13/16). The survival rate of embryo in A method is high, and the success rate of sex determination is low. B method is to determine the success rate of gender The success rate of sex determination by method C was higher than that by method A and B (p<0.05). The above results show that in the future, the C method will be improved.