ヒト化マウスを用いたドナー特異的HLA抗体(DSA)産生B細胞の分化・機能の解析

使用人源化小鼠分析供体特异性 HLA 抗体 (DSA) 产生 B 细胞的分化和功能

• 批准号: 17H00661
• 负责人: 野田 貴幸
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00661/
• 关键词: ヒト化マウス; B細胞培養; HLA抗体

【目的】ドナー特異的HLA抗体(DSA)は、抗体関連型拒絶反応による移植臓器廃絶の原因となる。しかし、DSAの有無と抗体関連型拒絶反応が連動しない、特に血清中で陰性のまま拒絶反応を来たす症例もある。我々はDSA産生前駆B細胞がレシピエント体内に存在しうると考え、患者末梢血B細胞培養によるDSAの検出を試みてきた。B細胞の活性化・分化に必須のサイトカインを加えるin vitro解析では、血清中DSA陽性例であっても検出されない症例を経験した。可能性として、未だ同定されていないB細胞の成熟に必須の因子の存在が考えられる。そこでDSA産生B細胞の分化・機能をin vivoで解析するために、ヒト末梢血リンパ球を用いたヒト化マウスの構築を試みた。【方法】T, B, NK細胞の欠失した重度免疫不全マウス(NSG)を用いた。尾静脈よりレシピエントPBMCを移入し、経時的に末梢血を採取した。免疫細胞の生着はフローサイトメトリーで検討した。【結果・考察】7日おきにマウス末梢血中のヒトCD3陽性細胞を確認したところ、35日目頃から著明に増えていた。その増殖はGVHD発症との関連を認めた。このことから、マウス体内におけるヒト末梢血リンパ球からのT細胞免疫系の構築が示唆された。一方、CD19陽性細胞は顕著な増加はみられなかった。本研究は動物の作出自体に時間を要するため、脾臓・骨髄の解析までは及ばなかった。本来、抗体産生B細胞が存在しやすい環境は、末梢血よりも脾臓・骨髄と考えられるため、今後は脾臓・骨髄の解析を試みる。B細胞が確認されたのち、ドナーリンパ球で感作を行うことで、DSA産生モデルができることを期待している。【意義・重要性】今回作製するDSA産生マウスモデルが構築できれば、抗体産生B細胞の局在・早期診断の有効性・慢性拒絶反応の機序の解明にも有用な情報を提供することが期待できる。

Objective: To explore the causes of transplant failure due to antibody-associated rejection of HLA antibodies (DSA). The presence or absence of antibody-associated rejection in DSA is associated with the presence or absence of negative rejection in serum. The presence of pre-DSA B cells in vivo and the presence of DSA B cells in peripheral blood culture were examined. B cell activation and differentiation must be increased in vitro analysis, DSA positive cases in serum The possibility of B cell maturation depends on the existence of factors that are necessary for B cell maturation. The differentiation and function of DSA producing B cells in vivo were analyzed, and the structure of DSA producing B cells in vivo was tested. [Methods] T, B, NK cells were deficient in severe immunodeficiency syndrome (NSG). The tail vein is filled with PBMC and the peripheral blood is collected. The immune cells are born in response to the disease. [Results] On the 7th, CD3 positive cells in the peripheral blood were confirmed. On the 35th, CD3 positive cells were detected. The relationship between GVHD development and reproduction is recognized. The construction of T cell immune system in vivo was studied. CD19 positive cells were found to be positive for CD19. This study focuses on the analysis of the time and structure of the animals. In fact, antibody-producing B cells exist in the environment, peripheral blood, bone marrow, bone marrow B cells confirm that the cells are activated, and DSA produces the cells. [Significance and Importance] The current situation of DSA production, construction and antibody production of B cells, the effectiveness of early diagnosis, and the understanding of the mechanism of chronic rejection provide useful information.