コルヒチン中毒死における血中エンドトキシン測定の法医学的意義

秋水仙碱中毒死亡患者血液内毒素测定的法医学意义

基本信息

批准号：
17H00693
负责人：
堀岡希衣
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00693/
关键词：
法医学コルヒチンエンドトキシン

项目摘要

研究目的 : 法医学分野において、毒物を含有する植物の誤食による食中毒死亡例が報告されている。特にイヌサフランにはコルヒチンが含有されており、下痢や嘔吐などの症状がみられる。コルヒチンは細胞増殖を阻害する作用があるため、腸管粘膜上皮細胞は、その作用を強く受け腸管バリア機能が破綻すると予想される。その際、血中エンドトキシン濃度が上昇し、いわゆる「エンドトキシンショック」による重篤な症状を引き起こすことが推測される。こうした仮説から、法医解剖時所見、血中・臓器中のコルヒチン濃度に加えて、血中エンドトキシン濃度がコルヒチン中毒死のマーカーとして法医診断上有用であるか検討することを目的とし、本研究を行った。研究方法 :①コルヒチンが腸管バリア機能を破綻させるか確認するため、大腸癌細胞株Caco-2を単層培養し、コルヒチンを含んだ培養液で培養して、タイトジャンクション蛋白質であるZO-1の発現量をウエスタンブロット法及び免疫蛍光染色によって解析した。②コルヒチンをマウスに経口投与し、死に至る前に採血と各臓器の摘出を行う。血清を検体として、エンドトキシン測定キットを用いて血中エンドトキシン濃度を測定する。摘出した臓器から病理組織標本を作成し、ヘマトキシリン・エオジン染色及び抗ZO-1抗体を用いた免疫染色し、その形態変化を評価した。研究成果 :①コルヒチン添加12時間後のCaco-2において、ZO-1のタンパク発現低下が認められた。②血液からはエンドトキシン、TNFαが高濃度に検出された。また、コルヒチン投与群の小腸におけるZO-1の免疫蛍光染色で、腸管バリアの欠損を認めた。これらの結果から、コルヒチンが腸管バリア機能を破綻させ、エンドトキシンの上昇、さらにはエンドトキシンショックを誘導することが証明された。よって、血中エンドトキシン濃度を測定することは、法医診断の一助となることが示唆された。

研究目标：在法医领域，由于意外摄入含有毒素的植物而导致食物中毒的死亡。犬藏红花特别含有秋水仙碱，可能会引起腹泻和呕吐等症状。由于秋水仙碱具有抑制细胞增殖的作用，因此预计肠粘膜上皮细胞将受到肠道屏障功能的影响的强烈影响。目前，据估计，血液内毒素浓度将增加，从而导致由所谓的“内毒素休克”引起的严重症状。基于这些假设，进行了这项研究，目的是研究血液内毒素浓度以及法医尸检发现以及血液和器官秋水仙碱浓度以及血液内毒素浓度是否对法医诊断作为秋水仙碱中毒死亡的标志。研究方法：1）确认秋水仙碱是否分解肠道屏障功能，在单层中培养结肠癌细胞系CACO-2，在含有秋水仙碱的培养基中培养的单层培养，并通过蛋白质斑点和免疫荧光散发分析了紧密连接蛋白ZO-1的表达水平。 2）秋水仙碱口服给小鼠，并收集血液，并在死亡前去除每个器官。使用血清作为标本，使用内毒素测量试剂盒测量血液内毒素浓度。从切除的器官中制备组织病理学标本，并使用苏木精 - 欧洲蛋白染色进行免疫染色，并使用抗-ZO-1抗体来评估其形态变化。研究结果：1）在加入秋水仙碱后12小时中观察到ZO-1的蛋白质表达降低。 2）在血液中检测到高浓度的内毒素和TNFα。此外，秋甲酸基团小肠中ZO-1的免疫荧光染色显示出肠屏障的缺陷。这些结果表明，秋水仙碱会破坏肠道屏障功能，诱导内毒素升高甚至内毒素休克。因此，建议测量血液内毒素水平有助于法医诊断。