Ndfip2遺伝子mRNA発現がカルシニューリン阻害剤の免疫抑制活性に及ぼす影響

【研究目的】カルシニューリン阻害剤(CNI)は主にT細胞におけるサイトカイン産生を抑制することによって免疫抑制活性を示す。近年、CNIによってヒト末梢血単核球(PBMC)におけるmRNA発現が抑制される新規遺伝子としてNdfip2が発見され、本遺伝子が拒絶反応等の免疫応答に関与している可能性が示唆された。しかし、PBMCには様々な細胞が混在しており、Ndfip2のmRNA発現変化の主要因はどの白血球系細胞によるものなのかは明らかではない。またNdfip2と拒絶反応との関係も不明である。そこで本研究ではNdfip2の機能解析を目的にヒト白血病性T細胞株(Jurkat)やヒト単球由来細胞株(THP-1)を用いてNdfip2のmRNA発現を観察し、Ndfip2発現に関与する白血球系細胞を探索した。【研究方法】JurkatやTHP-1に対してサイトカイン発現を誘導するボルボールミリステートアセテート(PMA)およびイオノマイシン(IM)を用いて刺激を行った。刺激前および刺激後2、4、6、8、12時間後にISOGEN-LSを用いてtotal RNAを抽出し、SYBR-Greenを用いたリアルタイムPCR法によってNdfip2のmRNA発現量の経時変化を測定した。【研究成果】PMA単剤もしくはPMA・IM両誘導剤を用いてJurkatを刺激したところNdfip2のmRNA発現量は時間経過とともに増加し、PMA・IM両誘導剤の刺激前に比べて刺激後12時間後ではNdfip2のmRNA発現量は約18倍に増加した。しかし、THP-1においては薬剤刺激の有無にかかわらずNdfip2のmRNA発現量変化はほとんどしなかった。これらの結果から、サイトカイン誘導条件下におけるNdfip2のmRNA発現にはT細胞が関与している可能性が示唆された。

【研究目的】カルシニューリン阻害剤(CNI)は主にT細胞におけるサイトカイン産生を抑制することによって免疫抑制活性を示す。近年、CNIによってヒト末梢血単核球(PBMC)におけるmRNA発現が抑制される新規遺伝子としてNdfip2が発見され、本遺伝子が拒絶反応等の免疫応答に関与している可能性が示唆された。しかし、PBMCには様々な細胞が混在しており、Ndfip2のmRNA発現変化の主要因はどの白血球系細胞によるものなのかは明らかではない。またNdfip2と拒絶反応との関係も不明である。そこで本研究ではNdfip2の機能解析を目的にヒト白血病性T細胞株(Jurkat)やヒト単球由来細胞株(THP-1)を用いてNdfip2のmRNA発現を観察し、Ndfip2発現に関与する白血球系細胞を探索した。【研究方法】JurkatやTHP-1に対してサイトカイン発現を誘導するボルボールミリステートアセテート(PMA)およびイオノマイシン(IM)を用いて刺激を行った。刺激前および刺激後2、4、6、8、12時間後にISOGEN-LSを用いてtotal RNAを抽出し、SYBR-Greenを用いたリアルタイムPCR法によってNdfip2のmRNA発現量の経時変化を測定した。【研究成果】PMA単剤もしくはPMA・IM両誘導剤を用いてJurkatを刺激したところNdfip2のmRNA発現量は時間経過とともに増加し、PMA・IM両誘導剤の刺激前に比べて刺激後12時間後ではNdfip2のmRNA発現量は約18倍に増加した。しかし、THP-1においては薬剤刺激の有無にかかわらずNdfip2のmRNA発現量変化はほとんどしなかった。これらの結果から、サイトカイン誘導条件下におけるNdfip2のmRNA発現にはT細胞が関与している可能性が示唆された。