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人為的酸化ストレス負荷によるアポートシスの抑制-Jurkat細胞、ヒト好中球、ラット肝細胞を用いた研究-

人工氧化应激抑制细胞凋亡 -使用 Jurkat 细胞、人中性粒细胞和大鼠肝细胞的研究 -

基本信息

批准号：
14657388
负责人：
荒井俊之
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

人為的酸化ストレスが種々の細胞のアポトーシスを抑制するか否かを検討するため、以下の研究を行った。1.JurkatヒトT細胞に、抗ヒトFasモノクロール抗体にて、アポトーシスを誘導した(約4時間)。この時、外因性の人為的酸化ストレスとして過酸化水素を、内因性の人為的酸化ストレスとして細胞内で過酸化水素を産生する6-ホルミルプテリン(6FP)を負荷した。アポトーシスの程度は、ヨウ化プロピジウム(PI)とフローサイトメトリーを用いて、核の断片化を定量化することにより、評価した。結果、100μMの過酸化水素はアポトーシスを抑制せず、逆に促進した。一方、10-250μMの6FPはアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性化を、活性型カスパーゼ3抗体とフローサイトメトリーを用いて測定したところ、その活性化は抑制されていた。これより、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。2.ヒト好中球は、in vitroでは自発的にアポトーシスが進行する(約24時間)。過酸化水素ならびに6FPが、この自発的アポトーシスにおよぼす影響を検討した。100μMの過酸化水素は何ら影響をおよぼさなかったが、100-250μMの6FPはアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性化をイムノブロッティングにより、カスパーゼ3の活性を蛍光マイクロプレートリーダにより測定したところ、その活性化と活性は抑制されていた。これより、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。3.ラット初代培養肝細胞に腫瘍壊死因子(TNF-α)と転写阻害剤アクチノマイシンDを加えるとアポトーシスが誘導される(約16時間)。過酸化水素ならびに6FPが、このアポトーシスにおよぼす影響を検討したところ、100μMの過酸化水素はアポトーシスを抑制せず、逆に促進した。一方、100-250μMの6FPはこのアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性を基質と蛍光マイクロプレートリーダを用いて測定したところ、その活性は抑制されていた。これまた、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。以上の結果より、種々の細胞において、人為的に特に内因性に酸化ストレスを負荷することで、アポトーシスの成立を阻止し、細胞死を防ぎうるか可能性が示された。

The research on the inhibition of artificial acidification of cells was carried out. 1. Jurkat T cells, anti-Fas antibody, anti-Fas antibody induction (about 4 hours). This time, exogenous and artificial acidification process, endogenous and artificial acidification process, intracellular production of hyperacidified water, 6-Fp load. The degree of fragmentation is evaluated in terms of the degree of fragmentation. The results showed that 100μM peracidified water element could inhibit the growth and promote the growth of bacteria. A square, 10-250μM of 6FP anti-corruption The activity of the antibody is determined by the time and place of the antibody. The possibility of artificial acidification is demonstrated. 2. In the vitro, the self-contained situation is going on (about 24 hours). The influence of acid on the growth of the plant is discussed. 100μM and 6 μM respectively. The activity of the enzyme is determined by the enzyme. The possibility of artificial acidification is demonstrated. 3. TNF-α and TNF-α were induced in primary cultured hepatocytes. 6FP, 100μM peracidified water can inhibit and promote the growth of the disease. A square, 100-250μM of 6FP anti-corruption measures The activity of this enzyme is determined by the reaction of the enzyme to the substrate. The possibility of artificial acidification is shown. The above results show that the cell death rate is higher than that of the original cell death rate.