人為的酸化ストレス負荷によるアポートシスの抑制-Jurkat細胞、ヒト好中球、ラット肝細胞を用いた研究-

人工氧化应激抑制细胞凋亡 -使用 Jurkat 细胞、人中性粒细胞和大鼠肝细胞的研究 -

• 批准号: 14657388
• 负责人: 荒井 俊之
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657388/
• 关键词: 酸化ストレス; 過酸化水素; 6-ホリミルプテリン; JurkatヒトT細胞; 好中球; ラット初代培養肝細胞; アポトーシス; カスパーゼ

人為的酸化ストレスが種々の細胞のアポトーシスを抑制するか否かを検討するため、以下の研究を行った。1.JurkatヒトT細胞に、抗ヒトFasモノクロール抗体にて、アポトーシスを誘導した(約4時間)。この時、外因性の人為的酸化ストレスとして過酸化水素を、内因性の人為的酸化ストレスとして細胞内で過酸化水素を産生する6-ホルミルプテリン(6FP)を負荷した。アポトーシスの程度は、ヨウ化プロピジウム(PI)とフローサイトメトリーを用いて、核の断片化を定量化することにより、評価した。結果、100μMの過酸化水素はアポトーシスを抑制せず、逆に促進した。一方、10-250μMの6FPはアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性化を、活性型カスパーゼ3抗体とフローサイトメトリーを用いて測定したところ、その活性化は抑制されていた。これより、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。2.ヒト好中球は、in vitroでは自発的にアポトーシスが進行する(約24時間)。過酸化水素ならびに6FPが、この自発的アポトーシスにおよぼす影響を検討した。100μMの過酸化水素は何ら影響をおよぼさなかったが、100-250μMの6FPはアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性化をイムノブロッティングにより、カスパーゼ3の活性を蛍光マイクロプレートリーダにより測定したところ、その活性化と活性は抑制されていた。これより、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。3.ラット初代培養肝細胞に腫瘍壊死因子(TNF-α)と転写阻害剤アクチノマイシンDを加えるとアポトーシスが誘導される(約16時間)。過酸化水素ならびに6FPが、このアポトーシスにおよぼす影響を検討したところ、100μMの過酸化水素はアポトーシスを抑制せず、逆に促進した。一方、100-250μMの6FPはこのアポトーシスを抑制した。この時、カスパーゼ3の活性を基質と蛍光マイクロプレートリーダを用いて測定したところ、その活性は抑制されていた。これまた、内因性の人為的酸化ストレスがアポトーシスを抑制する可能性が示された。以上の結果より、種々の細胞において、人為的に特に内因性に酸化ストレスを負荷することで、アポトーシスの成立を阻止し、細胞死を防ぎうるか可能性が示された。

Man-made acidification ス ト レ ス が kind 々 の cells の ア ポ ト ー シ ス を inhibit す る か no か を beg す 検 る た め line, the following の を っ た. 1. Jurkat ヒ ト に T cells, resist ヒ ト Fas モ ノ ク ロ ー ル antibody に て, ア ポ ト ー シ ス を induced し た (about 4 time). こ の, external の man-made acidification ス ト レ ス と し て water acidification passes を, endogenous の man-made acidification ス ト レ ス と し て in cells で too acidic water element を produce す る 6 - ホ ル ミ ル プ テ リ ン (fp) 6 を load し た. は ア ポ ト ー シ ス の, ヨ ウ change プ ロ ピ ジ ウ ム (PI) と フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー を with い て, nuclear の fragment を quantitative す る こ と に よ り, review 価 し た. The results showed that 100μM <s:1> peracidified hydrolysin アポト アポト シスを シスを inhibited せず and reverse に promoted <s:1> た. One side, 10-250μM <s:1> 6FP アポト アポト シスを シスを シスを inhibits <s:1> た. こ の, カ ス パ ー ゼ 3 の activeness を type, active カ ス パ ー ゼ 3 antibody と フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー を with い て determination し た と こ ろ, そ の activeness は inhibit さ れ て い た. <s:1> れよ, endogenous or artificial acidification ストレスがアポト シスを シスを inhibits する possibility が shows された. 2. Youdaoplaceholder0 the center ball で, in vitroで で self-released にアポト ヒト シスが する(about 24 time). The effects of peracidified hydrolysin ならびに6FPが and the self-generated アポト ならびに シスにおよぼす シスにおよぼす を検 を検 を検 た. 100 mu M の too acidic water element は any ら affect を お よ ぼ さ な か っ た が 6, 100-250 mu M の fp は ア ポ ト ー シ ス を inhibit し た. When こ の, カ ス パ ー ゼ 3 の activeness を イ ム ノ ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り, カ ス パ ー ゼ 3 の active を 蛍 light マ イ ク ロ プ レ ー ト リ ー ダ に よ り determination し た と こ ろ, そ の activeness と inhibition さ は れ て い た. <s:1> れよ, endogenous or artificial acidification ストレスがアポト シスを シスを inhibits する possibility が shows された. 3. ラ ッ ト original culture hepatocytes に swollen sores 壊 death factors (TNF alpha) と planning write resistance against tonic ア ク チ ノ マ イ シ ン D を plus え る と ア ポ ト ー シ ス が induced さ れ る (16). Water acidification passes element な ら び に 6 fp が, こ の ア ポ ト ー シ ス に お よ ぼ す influence を beg し 検 た と こ ろ, 100 mu M の acidification of water element は ア ポ ト ー シ ス を inhibit せ ず, inverse に し た. One side, 100-250μM <s:1> 6FP, <s:1> <s:1> <s:1> アポト アポト シスを シスを シスを inhibits <s:1> た. こ の, カ ス パ ー ゼ 3 の を active matrix と 蛍 light マ イ ク ロ プ レ ー ト リ ー ダ を with い て determination し た と こ ろ, そ の inhibition さ は れ て い た. Youdaoplaceholder6 れまた, endogenous <s:1> artificial acidification ストレスがアポト シスを シスを シスを inhibition する possibility が shows された. の above results よ り, kind of 々 の cells に お い て, artificial に に endogenous に acidification ス ト レ ス を load す る こ と で, ア ポ ト ー シ ス の established を stop し, cells die を ぎ う る が か possibility in さ れ た.

项目成果

Maiko Nishioka, Tohiyuki Arai, et al.: "Effects of 6-formylpterin as an internal source of hydrogen peroxide on cell death of human peripheral blood leukocytes"Life Sciences. (in press). (2003)

Maiko Nishioka、Tohiyuki Arai 等人：“6-甲酰蝶呤作为过氧化氢内部来源对人外周血白细胞细胞死亡的影响”生命科学。