酸素分圧は胎児肝細胞のCYP3A分子種発現調節因子となりうるか?

氧分压可以调节胎儿肝细胞中 CYP3A 分子种类的表达吗？

• 批准号: 20926006
• 负责人: 鈴木 英二
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: 長野市民病院薬剤部
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20926006/
• 关键词: CYP3A; Hypoxia; mRNA

【研究目的】肝に発現するシトクロムP450(CYP)のうちCYP3A7は胎児肝総CYPの約50%を占めるが、出産後その発現量は急速に減少する一方、成人肝の主要な分子種であるCYP3A4は出生後増加し、1ヶ月で成人の30～40%に達する。このようなCYP3A7からCYP3A4への切り替えは周知の現象であるが、その機構は全く解明されていない。そこで胎児にとって出生に伴う最も大きな環境変化の1つである血中の酸素分圧に着目し、CYP発現調節機構との関連性を解明することにした。【研究方法】ヒト胎児肝細胞は、米国Applied Cell Biology Research Institute社より取得したヒト胎児初代肝細胞(6胎児肝混合、胎齢約13週)を用いた。細胞を播種後、擬似低酸素惹起化合物の塩化コバルト(CoCl_2)あるいはデスフェロキサミン(DFO)を経時的に添加し、CYP3Aの発現に及ぼす影響について検討した。CYP3Aに対する影響は、mRNAの発現をリアルタイムRT-PCR法にて行う。低酸素誘導因子Hypoxia-Inducible Facter-1(HIF-1)についてはクロマチン免疫沈降(ChIP)法で検討した。【研究成果】CYP3A7及び3A4においてDFO(50μM)を72時間処理することによりmRNAレベルで5.1倍の有意な誘導がみられた。しかしCOCl_2では、CYP3Aの誘導はみられなかった。そこでCYP3A誘導に関与する転写因子PGC1α、HNF4α、PXRのmRNAレベルでの検討を行ったが、誘導はみられなかった。またChIPでは、HIFがCYP3A遺伝子上のコンセンサス配列に結合しなかった。以上の結果より、擬似低酸素物質DFOの添加によるHFLのCYP3A7及び3A4誘導には、HIFを介さない特異的な誘導機構があることが示唆された。

[Objective] CYP3A7, a major molecular species in adult liver, accounts for approximately 50% of fetal liver CYP and rapidly decreases after birth. CYP3A4, a major molecular species in adult liver, increases after birth and reaches approximately 30 - 40% of adult CYP at 1 month. CYP3A7 is a well-known phenomenon, and its mechanism is completely explained. The relationship between the concentration of acid in the blood and the regulatory mechanism of CYP production is clarified. [Methods] Fetal hepatocytes were obtained from the Applied Cell Biology Research Institute of the United States and used in primary fetal hepatocytes (6 fetal liver mixtures, about 13 weeks of gestation). After cell seeding, the effects of the addition of pseudo-low acid elicitor compounds (CoCl_2) on CYP3A production and development were investigated. CYP3A affects mRNA expression and mRNA expression. Hypoxia-inducible Factor-1(HIF-1) is detected by ChIP. CYP3A7 and CYP3A4 were 5.1-fold more intentionally induced by DFO(50μM) at 72-time intervals. COCl_2 and CYP3A are induced by COCl_2 and CYP3A. CYP3A induction is related to mRNA expression of PGC1 α, HNF4 α and PXR. ChIP and HIF are linked to CYP3A genes. The above results suggest that CYP3A7 and CYP3A4 of HFL are induced by DFO, and HIF is a specific induction mechanism.