冷凍マンモスの連続組織薄切標本ど3D組織再構築を容易にする手技の開発

研究目的:申請者はロシア科学アカデミーのアレクセイ・チホノフ博士から共同研究の同意を得て、永久凍土から発掘されたマンモス肝臓(1)と肺のフォルマリン固定試料を入手している。また北極圏動物、主にホッキョクグマ(2)のデータ、新たに得られた国内の動物園で飼育後死亡したホッキョクグマ(3)の臓器、特に肝臓に注目して三次元的な形態学的手法で比較検討した。研究手法:これまで北極圏動物の形態学的解析にはHE法、アザン法、ズダンIII脂肪染色法、石井-石井鍍銀法、塩化金法および蛍光顕微鏡法を用いて行ってきた。これらの組織切片の作製にはパラフィン法、ザルトリウス凍結法を主に用いてきたが,連続切片を作製する際にパラフィン法ではブロック作製時の処置により、元のブロックに比べ、10～30%の縮みを起こす。また、ザルトリウス法では連続で均一の厚さの切片を得る事は非常に困難である。そこで、クリオスタットを用いた凍結フィルム法で連続切片を作製し、高倍率で顕微鏡撮影した隣接する画像を、コンピュータ上でつなぎ合わせ、広範囲に三次元的な形態学的比較をする事ができた。研究成果:北極圏動物の食物連鎖上位に位置する(2)の肝臓では、強いビタミンA自家蛍光と巨大な脂質滴が見られた。一方動物園で飼育されていた個体(3)では弱い自家蛍光が観察されたが、明確な脂質滴は判別できなかった。一方(1)ではビタミンAの自家蛍光も脂質滴も全く見られなかった。しかし、石井-石井鍍銀法で染め出すと(2)では疎らに見えた好銀性線維が、(3)では細胞周囲に強く多数見られた。しかし、(1)においては核等の細胞成分が検出できず、また、高密度の好銀性線維が組織全体にみられた。この現象が病気等に由来するものであるのか、あるいは死後の外的な圧力を受けていたことによるものなのかは、今後の追究の課題としたい。

研究目的:申請者はロシア科学アカデミーのアレクセイ・チホノフ博士から共同研究の同意を得て、永久凍土から発掘されたマンモス肝臓(1)と肺のフォルマリン固定試料を入手している。また北極圏動物、主にホッキョクグマ(2)のデータ、新たに得られた国内の動物園で飼育後死亡したホッキョクグマ(3)の臓器、特に肝臓に注目して三次元的な形態学的手法で比較検討した。研究手法:これまで北極圏動物の形態学的解析にはHE法、アザン法、ズダンIII脂肪染色法、石井-石井鍍銀法、塩化金法および蛍光顕微鏡法を用いて行ってきた。これらの組織切片の作製にはパラフィン法、ザルトリウス凍結法を主に用いてきたが,連続切片を作製する際にパラフィン法ではブロック作製時の処置により、元のブロックに比べ、10～30%の縮みを起こす。また、ザルトリウス法では連続で均一の厚さの切片を得る事は非常に困難である。そこで、クリオスタットを用いた凍結フィルム法で連続切片を作製し、高倍率で顕微鏡撮影した隣接する画像を、コンピュータ上でつなぎ合わせ、広範囲に三次元的な形態学的比較をする事ができた。研究成果:北極圏動物の食物連鎖上位に位置する(2)の肝臓では、強いビタミンA自家蛍光と巨大な脂質滴が見られた。一方動物園で飼育されていた個体(3)では弱い自家蛍光が観察されたが、明確な脂質滴は判別できなかった。一方(1)ではビタミンAの自家蛍光も脂質滴も全く見られなかった。しかし、石井-石井鍍銀法で染め出すと(2)では疎らに見えた好銀性線維が、(3)では細胞周囲に強く多数見られた。しかし、(1)においては核等の細胞成分が検出できず、また、高密度の好銀性線維が組織全体にみられた。この現象が病気等に由来するものであるのか、あるいは死後の外的な圧力を受けていたことによるものなのかは、今後の追究の課題としたい。