突然変異頻度から見るマウス精子形成過程における遺伝情報伝達の正確性

点击翻译按钮获取中文摘要

精子形成過程は、正確な遺伝情報を持つ膨大な数の精子を絶えず生産するという他には見られない特徴を有する。ところが、精子を通して次世代に伝わる遺伝情報の正確性がどのように保証されるのか、その実体は未だ明らかではない。そこで、精子形成過程における情報伝達の保存の実体を明らかにするために、マウス精巣より「全生殖細胞」とともに「未分化型精原細胞」「分化型精原細胞」「一次精母細胞」「精子細胞」「精子」の各段階の突然変異頻度を定量し、精子形成に至るまでの遺伝情報保証機構の検証を試みている。本研究では、生殖細胞がGFPでラベルされ、且つ、突然変異頻度検証系に適用できる遺伝子改変(Tg)マウスを作出した。このTgマウス精巣から調製した細胞を、GFPを指標にソーティングし、生殖細胞を分取した。さらに、精原細胞・一次精母細胞・精子細胞の各細胞群を精度良く分取するため、DNA染色蛍光試薬により定量した核酸量や、細胞のサイズ等のパラメータの検討を重ねた。その結果、95%以上の精度で、再現性良く各細胞群を分取する手法を確立した。精子は精巣上体尾部から外科的に調製した。一方、突然変異頻度を生殖細胞と比較する体細胞試料として、Tgマウスの脳及び肝臓を用いた。各組織からゲノムDNAを調製し、内在性(自然)突然変異を高感度に測定できるBig Blue【○!R】システム(Agilent社)によって、突然変異頻度を定量した。以上のように確立した技術を用いて、今後、各生殖細胞群の突然変異頻度を定量する。