病原真菌クリプトコックス・ネオフォルマンスのタンパク質分画法を用いた細胞周期解析

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Cryptococcus neoformansは、免疫力の低下したヒトに肺炎や髄膜炎を引き起こす担子菌系の病原性酵母であり、出芽酵母のモデル生物として知られる子嚢菌系酵母Saccharomyces cerevisiaeと異なる細胞周期制御機構を持つことを報告している。遺伝子解析の分野ではゲノム解析が終了し、その機能解析も進んでいるが、タンパク質の解析は進んでいない。本研究では、まず、クリプトコックス酵母細胞から採取したタンパク質を様々な分画法により解析する手法を確立し、その手法を用いて、細胞周期の各時期における発現タンパク質の解析を行い、本菌の感染メカニズムを探るための基礎的データを得ることを目的として行った。タンパク質解析は二次元電気泳動法により行った。従来の方法ではスポット数が多く、泳動後の解析に特別な機器が必要となるため、スポット数を絞り込む事により解析が容易になることが予想された。そこで本研究では、まず、一次元電気泳動に用いる乾燥ゲルのpHの幅が狭いものを選択した。それにより、各スポットの間隔が広がった。また、添加量を減らすことにより、比較的発現量が多いスポットに焦点を当てた。これらにより、発現に差のあるスポットの確認が容易になった。この方法を用いて、C. neoformansの細胞周期に関連するタンパク質の解析を行った。同調培養法により細胞周期の各時期のタンパク質を採取し、これらタンパク質について二次元電気泳動を行った。その結果、発現の異なる数個のスポットを確認し、それらのうち2つのスポットについてタンパク質分析を行うまでに至ることができた。