血小板におけるホスファチジルセリンの細胞表面への露出機構に関する研究

血小板中磷脂酰丝氨酸暴露于细胞表面的机制研究

• 批准号: 22931002
• 负责人: 伊井野 潤子
• 金额: $ 0.29万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22931002/
• 关键词: 生理活性脂質; リゾリン脂質; スフィンゴシン1リン酸(S1P)

血小板は止血・血栓の要であるとともに,多くの生理活性脂質を貯蔵・産生し活性化に伴って細胞外へ放出することで,種々の生体反応に関与している.我々は,血小板活性化によって起こるホスファチジルセリン(PS)の露出,それに伴うマイクロパーティクル(MP)の放出,さらにはこれらの現象に関わりの深いリゾリン脂質の役割を解明することを目指してきた.今回は本反応におけるスフィンゴシン-1-リン酸(sphingosine-1-phosphate:以下S1P)の関与に着目し,検討を行った.・血小板由来S1Pの測定健常人から採血により検体を得て洗浄血小板を作成し,刺激剤(コラーゲン)を用いて血小板活性化上清を採取した.この上清中のS1P放出量を,我々のグループが開発し(Yatomi et al. Annual. Biochem. 230:315-320, 1995),さらに改良したS1P測定法(オルトフタルアルデヒドによるプレカラム誘導体化・HPLC法)を用いて定量した。コラーゲン濃度の増加に伴って血小板凝集が認められ,S1P濃度が増加した.・リンパ球細胞表面上のS1P受容体の発現S1P受容体の発現の確認は,フローサイトメトリーを用いた細胞表面抗原解析により行った.リンパ球上のS1P_1受容体の発現を確認した.・本反応におけるリゾリン脂質の関与の解明S1P以外の血小板由来生理活性脂質(リン脂質・スフィンゴミエリン・リゾホスファチジルコリン・リゾホスファチジン酸:LPAなど)が及ぼす効果も併せて観察する目的で,すでに確立している測定系により,血小板活性化上清中の濃度を測定した.血小板活性化に伴いLPAの放出量は増加した.他の脂質と本反応との関連についてはさらなる検討が必要である.今後は,血小板由来S1Pとリンパ球の相互作用の機序について,jurkat細胞やFTY720を用いてさらなる検討を進めていきたい.

血小板是止血和血栓形成的关键，并且通过储存和产生许多生理活性的脂质并在激活时将它们释放出来，并通过储存和产生许多生理活性的脂质来参与各种生物反应。我们的目的是阐明与这些现象密切相关的溶物磷脂的作用。在本文中，我们专注于鞘氨酸-1-磷酸盐（S1P）参与此反应。通过健康个体的血液样本收集血小板来源的S1P，以创建洗涤后的血小板，并使用刺激剂（胶原蛋白）收集血小板激活的上清液。我们的小组开发了该上清液中释放的S1P量（Yatomi等人使用改进的S1P测定法进行定量测定（用正交醛醛，HPLC方法进行了定量测定，HPLC方法）。血小板聚集在胶质浓度和S1P浓度增加的S1P受体中的表达较高。通过流式细胞仪证实了S1P_1受体在淋巴细胞上的表达。溶血磷酸：LPA等，使用已经建立的测量系统测量了血小板激活的上清液中的浓度。将来，我们将继续研究使用Jurkat细胞和FTY720的血小板衍生的S1P和淋巴细胞之间相互作用的机制。