血漿スフィンゴシン1-リン酸代用検査法としてのアポリポ蛋白M解析と臨床検査法確立

载脂蛋白M分析作为血浆1-磷酸鞘氨醇的替代检测方法及临床检测方法的建立

• 批准号: 25931005
• 负责人: 伊井野 潤子
• 金额: $ 0.26万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25931005/
• 关键词: 生理活性脂質; スフィンゴシン1-リン酸(S1P); アポリポ蛋白M(apoM)

[目的]スフィンゴシン1-リン酸(以下S1P)は, 細胞増殖作用, 細胞運動・形態調節作用など多彩な作用を及ぼす生理活性脂質であり, 臨床的には動脈硬化性疾患, 糖代謝疾患, 血液疾患, 神経疾患との関連が報告されている. しかし血漿検体サンプリングの困難さ, S1P測定の際の操作の煩雑さからS1Pの臨床検査への応用は難しく, 代用できる簡便な検査指標の確立が必要である. 今回われわれは, S1Pの輸送体, および代謝調節蛋白であるアポリポ蛋白M(以下apoM)に着目し, apoMがS1Pの代替バイオマーカーになるかを検討することを目標とした.[成果]1)apoMの測定法を確立するため, 市販のapoM ELISAキットを用いて血漿検体のapoMの定量を試みた. 検体の希釈倍率や基質の反応時間・反応温度を変えて検討を行ったが再現性力宝得られず, 正確な測定ができなかった. またapoMを過剰発現させた細胞上清にも反応しなかった. その原因として, キットに用いられている抗apoM抗体とapoMとの特異的反応が弱いことがわかった。2)次に当研究室と試薬メーカーが共同開発したapoM ELISAキットを用いて, 血漿検体, apoMを過剰発現させた細胞上清を測定したところapoMが測定可能であり, 同時・日差再現性も良好であった. また患者検体においては11.8～53.7μg/mL (n=61)であった。[意義]本研究は, 公表されているいくつかの臨床研究で使用されている市販のapoM ELISAキットが日常臨床検査に求められる性能がない可能性があり, 研究計画が大幅に遅れてしまったが, 信頼できるapoMの測定系を確立することができた. 今後今回確立したapoMの測定系を用いて, S1PとapoMの関係の検討とともに, apoMの重要性について否定的な報告がでている疾患に関しても, 再検討する必要性があると考える.

[Objective] To study the relationship between S1P and atherosclerosis, glucose metabolism, blood disorders and neurological disorders. It is necessary to establish simple and convenient indexes for clinical examination of S1P. In this paper, S1P transporter, apoM and metabolic regulator protein are discussed. [Results]1) The apoM assay was established and the apoM ELISA assay was used in the determination of apoM in plasma samples. The desired magnification of the sample, the reaction time of the substrate, and the reaction temperature are changed to determine the reproducibility of the sample. The apo M was found in the supernatant of the cell. The reason for this is that anti-apoM antibodies are weak and specific. 2)The apoM ELISA assay was developed in the laboratory and the plasma samples were detected in the cell supernatant. 11.8~53.7μg/mL (n=61). [Significance] This study demonstrates the possibility of using commercially available apoM ELISA for routine clinical investigations, and the research plan has been greatly expanded to establish a reliable apoM assay system. In the future, we will establish the apoM measurement system, discuss the relationship between S1P and apoM, discuss the importance of apoM, and reexamine the necessity of apoM.