血漿スフィンゴシン1-リン酸代用検査法としてのアポリポ蛋白M解析と臨床検査法確立

载脂蛋白M分析作为血浆1-磷酸鞘氨醇的替代检测方法及临床检测方法的建立

• 批准号: 25931005
• 负责人: 伊井野 潤子
• 金额: $ 0.26万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25931005/
• 关键词: 生理活性脂質; スフィンゴシン1-リン酸(S1P); アポリポ蛋白M(apoM)

[目的]スフィンゴシン1-リン酸(以下S1P)は, 細胞増殖作用, 細胞運動・形態調節作用など多彩な作用を及ぼす生理活性脂質であり, 臨床的には動脈硬化性疾患, 糖代謝疾患, 血液疾患, 神経疾患との関連が報告されている. しかし血漿検体サンプリングの困難さ, S1P測定の際の操作の煩雑さからS1Pの臨床検査への応用は難しく, 代用できる簡便な検査指標の確立が必要である. 今回われわれは, S1Pの輸送体, および代謝調節蛋白であるアポリポ蛋白M(以下apoM)に着目し, apoMがS1Pの代替バイオマーカーになるかを検討することを目標とした.[成果]1)apoMの測定法を確立するため, 市販のapoM ELISAキットを用いて血漿検体のapoMの定量を試みた. 検体の希釈倍率や基質の反応時間・反応温度を変えて検討を行ったが再現性力宝得られず, 正確な測定ができなかった. またapoMを過剰発現させた細胞上清にも反応しなかった. その原因として, キットに用いられている抗apoM抗体とapoMとの特異的反応が弱いことがわかった。2)次に当研究室と試薬メーカーが共同開発したapoM ELISAキットを用いて, 血漿検体, apoMを過剰発現させた細胞上清を測定したところapoMが測定可能であり, 同時・日差再現性も良好であった. また患者検体においては11.8～53.7μg/mL (n=61)であった。[意義]本研究は, 公表されているいくつかの臨床研究で使用されている市販のapoM ELISAキットが日常臨床検査に求められる性能がない可能性があり, 研究計画が大幅に遅れてしまったが, 信頼できるapoMの測定系を確立することができた. 今後今回確立したapoMの測定系を用いて, S1PとapoMの関係の検討とともに, apoMの重要性について否定的な報告がでている疾患に関しても, 再検討する必要性があると考える.

[目的] 1-磷酸鞘氨酸（以下称为S1P）是一种生理活跃的脂质，具有各种作用，例如细胞增殖和细胞运动和形态学调节，并且在临床上与动脉粥样硬化疾病有关，血糖素代谢性疾病，血液疾病，血液疾病，血液疾病，血液疾病，神经学疾病和神经学疾病。但是，由于测量血浆标本的难度和测量S1P的操作的复杂性，因此很难将S1P应用于临床测试，因此有必要建立一个简单且替代测试指标。在本文中，我们专注于S1P转运蛋白和代谢调节蛋白载脂蛋白M（以下称为APOM），目的是考虑APOM是否是S1P的替代生物标志物。 [结果] 1）为了建立一种测量APOM的方法，我们已经建立了一个可商购的APOM。我们尝试使用ELISA试剂盒来量化血浆标本中的APOM。我们通过改变样品的稀释比，底物的反应时间和温度来研究样品，但是我们无法获得可重复性，并且无法进行准确的测量。此外，细胞上清液过表达的APOM没有反应。为此，发现在试剂盒和APOM中使用的抗APOM抗体之间的特定反应很弱。 2）接下来，使用我们的实验室和试剂制造商共同开发的APOM ELISA试剂盒，血浆标本和细胞上清液过表达APOM，可以测量APOM，同时和每日可重复性也很好。另外，患者的标本范围为11.8至53.7μg/ml（n = 61）。 [摘要]这项研究表明，在几项已发表的临床研究中使用的市售APOM ELISA试剂盒可能没有每日临床测试所需的性能，尽管研究计划显着延迟，但我们能够建立可靠的APOM测量系统。我们认为，有必要在将来审查S1P和APOM之间的关系，并审查报告据报道APOM重要性的负面报道的疾病。