カルシニューリン阻害薬による新たな拒絶反応の予防法の確立

【目的】臓器移植に用いられる免疫抑制剤のタクロリムスは、投与量決定困難薬剤として全血を用いた血中濃度モニタリングが必要とされている。近年、全血濃度を高値に維持した症例でも拒絶反応が抑制されず、従来のタクロリムス血中濃度モニタリングのみでは不十分であることが明らかされた。そこで、本研究では、全血濃度に加え、カルシニューリン阻害薬の免疫抑制効果と直接に関連する血漿濃度をモニタリングし、さらに、生体内で免疫応答に関与する細胞群の活性の変化もモニタリングする新たな拒絶反応の予防法の確立を試みた。【方法】健常人から採取した血液を対象とした。まず、対象血液のヘマトクリット(Ht)値を実験的に10、20、30、40、50%に調整した。次に、タクロリムスを添加し、全血濃度を0、10、20、40、80ng/mLに調整した後、イオノマイシン(120、250ng/mL)とホルボール12-ミリステート13-アセテート(50、100ng/mL)を添加し、37度で0、2、4、8、16、24時間培養した。培養後、全血と血漿中のタクロリムス濃度を化学発光免疫測定法と酵素標識免疫測定法で測定した。同時に、生体内における免疫応答の変化をモニタリングするために、白血球からmessenger RNA (mRNA)を抽出し、real-time逆転写PCR法でinterleukin2(IL-2)、Forkhead box P3 (FoxP3)のmRNA量を定量した。【結果】本研究では、タクロリムス血中濃度の測定と同時に、IL-2、FoxP3のmRNA量を定量する手法を確立した。しかし、タクロリムス血漿濃度が免疫応答の指標であるIL-2、FoxP3のmRNA量の発現量に及ぼす影響を明らかすることはできなかった。一方で、移植症例の検討からは、初期のHt値が低い症例ほど、拒絶反応を発症し難いことが再確認できた。

【目的】臓器移植に用いられる免疫抑制剤のタクロリムスは、投与量決定困難薬剤として全血を用いた血中濃度モニタリングが必要とされている。近年、全血濃度を高値に維持した症例でも拒絶反応が抑制されず、従来のタクロリムス血中濃度モニタリングのみでは不十分であることが明らかされた。そこで、本研究では、全血濃度に加え、カルシニューリン阻害薬の免疫抑制効果と直接に関連する血漿濃度をモニタリングし、さらに、生体内で免疫応答に関与する細胞群の活性の変化もモニタリングする新たな拒絶反応の予防法の確立を試みた。【方法】健常人から採取した血液を対象とした。まず、対象血液のヘマトクリット(Ht)値を実験的に10、20、30、40、50%に調整した。次に、タクロリムスを添加し、全血濃度を0、10、20、40、80ng/mLに調整した後、イオノマイシン(120、250ng/mL)とホルボール12-ミリステート13-アセテート(50、100ng/mL)を添加し、37度で0、2、4、8、16、24時間培養した。培養後、全血と血漿中のタクロリムス濃度を化学発光免疫測定法と酵素標識免疫測定法で測定した。同時に、生体内における免疫応答の変化をモニタリングするために、白血球からmessenger RNA (mRNA)を抽出し、real-time逆転写PCR法でinterleukin2(IL-2)、Forkhead box P3 (FoxP3)のmRNA量を定量した。【結果】本研究では、タクロリムス血中濃度の測定と同時に、IL-2、FoxP3のmRNA量を定量する手法を確立した。しかし、タクロリムス血漿濃度が免疫応答の指標であるIL-2、FoxP3のmRNA量の発現量に及ぼす影響を明らかすることはできなかった。一方で、移植症例の検討からは、初期のHt値が低い症例ほど、拒絶反応を発症し難いことが再確認できた。