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極めて低レベルの第VIII因子活性を定量するための改変凝固1段法の検討

检查一种改良的一步式凝血方法，用于量化极低水平的因子 VIII 活性

基本信息

批准号：
24931023
负责人：
田中亮子
金额：
$ 0.26万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24931023/
关键词：
血液凝固第VIII因子 APTT 第VIII因子欠乏血漿

项目摘要

血友病A治療において低値域の第VIII因子(FVIII)活性を正確に測定することは, 重症度診断や臨床経過を予測する上で極めて重要である. FVIII活性は凝固1段法による測定方法が一般的で, 凝固測定試薬(APTT試薬やFVIII欠乏血漿)や測定機器の特性が検査値に影響する. 実際, 血友病A同一検体でのサーベイの結果, 施設間差が著しい事が報告されている. このことから, APTT試薬や機器の特性を調査し, 低値のFVIII活性を感度よく, 正確に測定できる系を確立することを目的とした. 最初に, APTT試薬のFVIII感受性評価のため, ボランティア採血から作成した正常血漿(プール血漿)もしくは各社の市販標準血漿と欠乏血漿を用いてFVIII活性稀釈系列血漿を作成し, 数種のAPTT試薬でAPTTを測定した. その際, プール血漿をFVIII活性100%とし, 各社の標準血漿のFVIII活性を測定して暫定値として用いた. この結果, 特にFVIII活性が5%以下では, その凝固時間の延長率がAPTT試薬に影響して, 試薬選定が重要であった. 故に, APTT延長率の大きい試薬により, 低値域のFVIII活性が感度良く測定可能であることが示唆された. 次に測定機器を1つに固定し, 各APTT試薬, プール血漿や各欠乏血漿を用いて, FVIII活性用検量線を作成した. APTT延長率の大きい試薬では, FVIII活性低値で検量線は直線性を示し, 低値域に関してもばらつきが少なく測定可能であった. この系でFVIII製剤(献血由来, 遺伝子組換え型)と各種欠乏血漿を用いたFVIII活性希釈系列血漿を作成しFVIII活性測定の精確性を評価し, 合成基質でのFVIII活性と比較した. その結果, 稀釈系列血漿調整時(前稀釈)もしくは測定系に用いる欠乏血漿の組合せの差異で, VIII活性値が異なった. 文献的にはFVIII製剤の前希釈や, 凝固1段法によるFVIII活性測定には, 血友病A症例の欠乏血漿(またはvon Willebrand 因子の正常なFVIII欠乏血漿)の使用が推奨されており, その測定系と合成基質法によるFVIII活性値は近い値であったものの理論値と一致しなかった. 以上の検討により, 試薬や欠乏血漿の特徴, その組合せによりFVIII活性値変動か生じるが, 標準物質がないためにその測定値の適切性は評価不可能であった. 今後, 本測定法による活性値について, トロンビン生成検査やThromboelastographyなどの凝固機能検査や, 実症例の臨床経過と比較を行う予定である.

Correct determination of factor VIII (FVIII) activity in the low range of hemophilia A therapy is extremely important for diagnosis of severity and prediction of clinical symptoms. FVIII activity is determined by the coagulation 1-stage method. The coagulation assay (APTT assay and FVIII deficient plasma) and the characteristics of the assay machine are affected by the test results. In fact, hemophilia A is the same type of disease, and the results of treatment are different. This is the first time that APTT has been tested for FVIII activity. Initially, FVIII susceptibility to APTT was assessed by blood sampling to produce normal plasma, and then standard plasma and deficient plasma were used to produce diluted plasma series for FVIII activity in various APTT assays. When plasma FVIII activity is 100%, the standard plasma FVIII activity of each community is determined tentatively. In particular, if FVIII activity is less than 5%, the prolongation of coagulation time is affected by APTT test, and test selection is important. Therefore, APTT elongation rate is high in the test, and FVIII activity in the low range is sensitive to good measurement. In addition, the measurement machine is fixed, each APTT test reagent, plasma and deficient plasma are used, and FVIII activity is used to prepare the measurement line. APTT elongation rate in the middle of the test, FVIII activity low value of the test line is linear, low value range of the test line is not linear, low value range of the test line is less likely to be measured. This system of FVIII production (origin of blood donation, genetic sub-group conversion type) and the use of various deficient plasma in the FVIII activity of the plasma series to prepare FVIII activity determination accuracy evaluation, synthetic matrix FVIII activity and comparison. As a result, when diluted plasma is adjusted (prediluted), the difference between the measured values and the combination of deficient plasma is different. In the literature, the FVIII activity measurement by the coagulation one-stage method was compared with the theoretical value by the synthetic matrix method, and the FVIII activity value was compared with the theoretical value by the synthetic matrix method. In the above discussion, the characteristics of deficient plasma are tested, and the combination of FVIII activity values is changed. The suitability of standard materials is not possible. In the future, the activity value of this assay will be determined, and the test of Thromboelastography and coagulation function will be performed.