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エタノール固定細胞の細胞周期におけるタンパク発現差解析の検討

乙醇固定细胞细胞周期过程中差异蛋白表达分析

基本信息

批准号：
25930024
负责人：
山本淳子
金额：
$ 0.32万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25930024/
关键词：
細胞周期エタノール固定タンパク発現差解析

项目摘要

目的 : 細胞周期各段階の細胞をセルソーターで分取し、タンパクを抽出、蛍光二次元電気泳動法でタンパク発現差解析を行うことができる。しかし、細胞周期を明確に分けるためにはエタノール固定が必要であるため、エタノール固定細胞でタンパク発現差解析が可能か検討する。計画 : 1 エタノール固定細胞で蛍光二次元電気泳動が可能か検討する。2 エタノール固定により消失・減量するタンパクの検討。3 生細胞とエタノール固定細胞の細胞周期各段階の細胞のタンパク発現差解析を比較し、エタノール固定細胞を使用することが有効か検討する。結果 : 1 エタノール固定細胞で蛍光二次元電気泳動を行ったところ、等電点・分子量による分離や蛍光は、生細胞と比較して変わりなく検出できた。2 エタノール固定細胞では低分子量のタンパクが多く減少した。分子量が大きくなるほど減少するタンパクは少なくなった。3 生細胞の細胞周期各段階の発現差解析では、単染色のため各段階を明確に分取できず、発現差のあるタンパクは少なかった。エタノール固定細胞は、多重染色が可能なため細胞周期各段階を明確に分取でき、発現差のあるタンパクを多く検出できた。考察 : エタノール固定細胞は多重染色が可能であるため、細胞周期各段階の細胞を明確に分取することができる。そのため、G1期やG2/M期にS期の細胞が混ざることがなく、細胞周期各段階の発現差解析には有効であることは分かったが、エタノール固定により減少するタンパクが多くあるため、この点の検討が必要と考えられる。

Objective: To analyze the differences of cell cycle in different stages by two-dimensional electrokinetic method. The cell cycle is clearly defined and fixed. It is necessary to analyze the cell cycle. It is possible to analyze the cell cycle. Project: 1. Immobilized cells, light, two-dimensional electromobility, and possible detection. 2. Fixed and decreased. 3. Cell cycle analysis of different stages of growth and development of fixed cells Results: 1. Fixed cells were isolated from light by two-dimensional electrophoresis, isoelectric point and molecular weight. 2. Immobilized cells are low molecular weight and low molecular weight. The molecular weight increases and decreases. 3. The analysis of cell cycle development in different stages of cell cycle is carried out in detail. Fixed cells, multiple staining, clear separation of cell cycle stages, detection of differences, multiple staining Investigation: Fixed cells can be stained multiple times, and cells at various stages of the cell cycle can be clearly separated. Cell cycle analysis of different stages of cell cycle is necessary.