細胞内情報伝達網におけるプロテインキナーゼCとホスホリパーゼDの連関機構の解析

细胞内信号转导网络中蛋白激酶C与磷脂酶D相互作用机制分析

• 批准号: 08770089
• 负责人: 吉田 公久
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770089/
• 关键词: ホスホリパーゼD; プロテイン・キナーゼC; G蛋白質; 燐脂質; ARF; RhoA

本研究では、受容体刺激に連動して生ずるコリン燐脂質代謝とプロテイン・キナーゼC活性化の共役機構を解析する目的で、コリン燐脂質代謝において中心的役割を演じる酵素であるホスホリパーゼD(PLD)の酵素活性調節機構の解析に焦点を絞り研究を行った。我々が確立したPLDの新たな独自の測定法を用いて酵素活性を解析した結果、PLDは細胞膜結合型蛋白質であり、今まで酵素活性が低いとされてきた脾臓と腎臓に最も高いPLD活性が存在し、肝臓を含む多くの臓器に普遍的に存在する酵素であることを明らかにした。その酵素活性発現には、細胞の可溶性画分に存在するARFやRhoAなどの低分子量G蛋白質、更に低分子量G蛋白質以外の蛋白質が酵素の活性化に関与することを示す実験的根拠を得た。この因子は分子量36kの熱安定性を示す蛋白質(p36)であり、組織分布がPLD酵素活性と一致することから、PLDの生理的な活性化因子であることが強く示唆された。また、細胞膜構成成分の一つであるエタノールアミン燐脂質がPLDの酵素発現に必須であることを証明し、PLDの活性化には蛋白質因子のみならず、燐脂質を含む複数の因子が関与していることを明らかにした。今後、PLDの完全精製、並びにPLDおよびp36の遺伝子クローニングを行い、PLDの酵素学的諸性質並びに活性化機構を明らかにすることにより、コリン燐脂質に由来するジアシルグリセロールの分子レベルでの産生機構を明らかにし、PKCの活性化のメカニズムを解明することが急務と考えられた。

The purpose of this study is to analyze the purpose of this study, and the purpose of this study is to analyze the purpose of this study, and to analyze the focus of the research on enzyme activity in the center of the center for the production of enzymes (PLD). The purpose of this study is to analyze the purpose of this study, and to analyze the focus of the analysis of enzyme activity in the center. We made sure that the new PLD assay was used to analyze the results of enzyme activity analysis, PLD enzyme activity analysis, cell membrane binding protein assay, current enzyme activity test, low enzyme activity assay, spleen enzyme activity test, liver enzyme activity analysis, and liver test. There are ARF, RhoA, low molecular weight G protein, low molecular weight G protein, enzyme activating enzyme and cell soluble protein other than low molecular weight G protein. The molecular weight of PLD factor was 36k, and the stability of protein (p36), tissue distribution of PLD enzyme activity and activation factor of PLD physiology showed that protein (p36), tissue distribution and tissue distribution were consistent. The components of cell membrane and cell membrane must be activated by PLD enzyme, PLD protein factor, lipid factor and complex factor, respectively. In the future, the PLD system has been used to improve the performance of the p36 system, and the mechanism of PLD zymology has been used to understand the cause of the disease. The molecular system has been used in the health care system, and the PKC system has been used to understand the urgent business of the company.

项目成果

Shimooku,K.: "Reconstitution of GTP-γ-S-dependent phospholipase D activity with ARF,RhoA,and a soluble 36-kDa protein." FEBS Lett.387. 141-144 (1996)

Shimooku, K.：“用 ARF、RhoA 和可溶性 36-kDa 蛋白重建 GTP-γ-S 依赖性磷脂酶 D 活性。” FEBS Lett.387 (1996)。

Nakamura,S.: "Mammalian phospholipase D : Phosphatidylethanolamine as an essential component" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 4300-4304 (1996)

Nakamura,S.：“哺乳动物磷脂酶 D：磷脂酰乙醇胺作为重要成分”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。