C型慢性肝炎に対するインターフェロンの有効性に影響を及ぼす組織学的因子について

关于影响干扰素治疗慢性丙型肝炎疗效的组织学因素

• 批准号: 08770134
• 负责人: 伊倉 義弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770134/
• 关键词: HCV RNA; RT in situ PCR; 組織化学

C型慢性肝炎患者肝生検組織におけるウイルスRNAの分布とインターフェロンの効果との関連性を明らかにすることを最終的な目標に据えて研究を開始した。まず、組織中のウイルスRNA分布を高感度にしかも特異性高く検出するための方法としてRT in situ PCR法を採用し、その至適反応条件を求める予備実験を行った。Nuovoらによって提唱された方法に従い、4μm厚のパラフィン切片を脱パラフィン、除タンパク処理後、DNase溶液で37℃17時間インキュベートし、DNA消化を行った。次に、逆転写酵素とHCVに対する特異的アンチセンスプライマーを用いて組織切片上でcDNAを合成、さらにDNAポリメラーゼ、センスプライマー、アンチセンスプライマーを含むPCR溶液にジゴキシゲニン標識したdUTPを加えて切片にのせ、サーマルサイクラ-でPCRを行った。HCV感染3例、HBV感染1例を検討したところ、HBV感染例でも陽性所見が出るなど、特異性にやや問題があることが明らかとなった。特異性の改善と手技の簡素化を図るべく、逆転写とDNA増幅が一度に行えるTthポリメラーゼとジゴキシゲニン標識プライマーを用いた改変In situ PCRを案出し、同様に至適反応条件を求めた。その結果、肝細胞および門脈域単核細胞の細胞質にHCVに対する染色が得られ、その染色パターンは以前にIn situハイブリダイゼーションで得られた結果に類似していた。B型慢性肝炎症例では瀰漫性にかすかな背景染色を見るのみで、特異的な染色は観察されなかった。以上より、簡便で特異性の高いHCV染色法が確立出来たと考えられ、今後は本手技をもって更なる組織化学的検討を加えていきたい。

The distribution of RNA in liver tissues of patients with chronic hepatitis C was investigated. The method of high sensitivity and specificity of RNA distribution in tissues and tissues was developed by RT in situ PCR. Nuovo, 4μm thick, DNase solution at 37℃ for 17 hours, DNA digestion. DNA synthesis, DNA sequencing, DNA sequencing and PCR in tissue sections were performed using reverse transcription enzymes and HCV specific primers. HCV infection in 3 cases, HBV infection in 1 case, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 cases, HCV infection in 3 cases, HBV infection in 3 Specificity and simplicity of DNA amplification by one degree The results were similar to those obtained In the cytoplasm of hepatocytes and portal cells Diffuse background staining and specific staining were observed in chronic hepatitis B. The above simple and specific HCV staining method has been established. The histochemical analysis of this technique will be further improved in the future.

项目成果

伊倉義弘ほか: "RT in situ PCR法改良の試み" 日本病理学会会誌. 86・1 (印刷中). (1997)

Yoshihiro Ikura 等：“尝试改进 RT 原位 PCR 方法”日本病理学会杂志 86・1（出版中）。