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腸炎ビブリオの持つ菌体結合性赤血球凝集素(cHA)の腸管定着因子としての解析

副溶血弧菌细菌细胞结合血凝素 (cHA) 作为肠道定植因子的分析

基本信息

批准号：
08770188
负责人：
永山憲市
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770188/
关键词：
腸炎ビブリオ定着因子 cHA クローニング細胞骨格

项目摘要

腸炎ビブリオの病原性としては、腸管定着能と毒素産生性が挙げられる。現在までに本研究での研究対象であるcHA(Cell-associated hemagglutinin)が腸管定着因子として機能することをCaco-2細胞(ヒト大腸上皮細胞由来)等の培養細胞や単離小腸上皮細胞を用いて証明してきた。さらに本研究ではcHAの機能解析を遺伝子レベルで行うとともに、腸炎ビブリオが細胞に定着した後に、細胞にどのような影響を与えているのかを細胞生物学的に検討した。1 cHA構造遺伝子のクローニングを行うため、左記遺伝子の欠落した腸炎ビブリオをinsertion mutation法を用いて作成し、赤血球凝集能が失われ、かつ培養細胞への定着能が低下した変異株を得た。現在、この変異株を用いてcHA構造遺伝子のクローニングを行っている。2 腸炎ビブリオは小腸上皮細胞に定着し、毒素を産生して下痢原性を発揮すると考えられる。しかしながら、腸炎ビブリオのcHAを介した上皮細胞への定着が細胞にどのような影響を与えるのかは全く不明である。そこでCaco-2細胞を腸炎ビブリオ(cHA^+)を感染させた後、免疫蛍光染色法を用いて、細胞骨格タンパク(F-アクチン、微小管構成タンパク)の変化を解析したところ、菌が定着した部位に特異的にF-アクチンと微小管が凝集し、細胞骨格の再構築が起こっていることが明らかとなった。

Enteritis is pathogenic, intestinal stability and toxin production. In the present study, the function of cHA(Cell-associated hemagglutinin) as an intestinal homeostatic factor was demonstrated in cultured cells such as Caco-2 cells and isolated small intestinal epithelial cells. In this study, the functional analysis of cHA was carried out in the study of cell biology. 1 cHA structural gene expression is determined by the insertion mutation method, and the hemagglutination activity is lost. The static activity of cultured cells is reduced. Now, this variant is used in the construction of cHA. 2. Intestinal epithelial cells are stable and toxic. The epithelial cells are fixed in place. The cells are affected by inflammation. After infection of Caco-2 cells with cHA^+, immunofluorescence staining was used to analyze the transformation of cytoskeleton (F-actin, microtubule formation), and F-actin, microtubule aggregation, and cytoskeleton reconstruction were performed.