Bordetella壊死毒の機能ドメインの解析

坏死博德特氏菌毒素的功能域分析

• 批准号: 08770190
• 负责人: 堀口 安彦
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770190/
• 关键词: Bordetella壊死毒; モノクローナル抗体; 抗原決定基

Bordetella bronchiseptica壊死毒(DNT)に対するモノクローナル抗体11クローンを作製した。そのうちDNT活性中和能をもつ2B3抗体と、中和能を持たない1A3抗体が認識する抗原決定基のDNT上の領域を以下のように調べた。DNT(分子量150,000)をトリプシンで処理し、分子量約90,000と約60,000のそれぞれC末端側とN末端側に位置する主要な二つの毒素フラグメント(90k frag.と60k frag.)を得た。また、DNT遺伝子の制限酵素認識部位を利用し8種類の部位欠失DNT変異体を作製した。毒素フラグメントと部位欠失DNT変異体を電気泳動し、上述の2種の抗体を用いてイムノブロッティングを行い、それぞれの抗体が反応するかどうかを調べた。その結果、両抗体はN末端側から889残基のアミノ酸で構成される変異体に反応した。2B3抗体は270残基目から1,059残基目までを欠失した変異体に反応したが、48残基目から474残基目を欠失した変異体と45残基目から約500残基目までで構成される60k frag.には反応しなかった。一方、1A3抗体は60k frag.には反応したが、284残基目から550残基目までのアミノ酸を欠失した変異体には反応しなかった。これらの結果を総合したところ、抗DNTモノクローナル抗体の反応1A3と2B3が認識する抗原決定基は各々、DNTのN末端側より284-474アミノ酸残基の位置と、45-48アミノ酸残基の近傍に局在する事が明らかとなった。現在、DNTの機能的ドメインの構造についてさらに解析を進めている。

Bordetella bronchiseptica壊死toxic(DNT)に対するモノクローナルantibody 11クローンをproduced by した.そのうちDNT activity neutralizing ability をもつ2B3 antibody と, neutralizing ability をholding たない1A3 antibody が recognition するantigenic epitope の field の area を following のようにadjusted べた. DNT (molecular weight: 150,000) is treated with Tetrafluoroethylene, molecular weight is about 90,000 and about 60 ,000のそれぞれC terminal side N terminal side に position するmain な二つのtoxic フラグメント(90k frag.と60k frag.)を得た.また、DNT-restricted enzyme recognition parts are used to make use of 8 types of parts missing DNT allotypes. The toxin フラグメントとsite is missing DNT allogeneic electrophoresis, and the above two kinds of antibodies are usedいてイムノブロッティングを行い、それぞれのantibodies がanti応するかどうかを动べた. As a result, the N-terminal side of the antibody is composed of the 889 residues of the amino acid, which is the anti-antibody. 2B3 antibody has 270 residues, 1,059 residues, and 48 residues. The target is 474 residues, the target is missing, the variant is 45 residues, the target is about 500 residues, the target is composed of, and the target is 60k frag. On the one hand, the 1A3 antibody has a 60k fragment, a 284-residue antibody, a 550-residue antibody, and an allogeneic antibody.これらのRESULTSを総合したところ, anti-DNT モノクローナルantibodies のanti-1A3と2B3がcognition する Epitope はeach々, DN T's N-terminal side contains 284-474 amine acid residues and 45-48 amine acid residues. Now, the structure and structure of DNT's function are analyzed and analyzed.