百日咳菌の特異的なヒト感染性を規定する因子の検索

寻找决定百日咳博德特氏菌对人类的特异性感染性的因素

• 批准号: 17659130
• 负责人: 堀口 安彦
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659130/
• 关键词: 百日咳菌; Creリコンビナーゼ; In vivo expression technology (IVET); In vivo expression technology(IVET)

Bordetella属細菌を用いて、in vivo expression technology (IVET)を導入することが本研究課題の当初の目的である。そこで、細菌感染時に転写活性の上昇するプロモーターをクローニングするために遺伝子組み換え誘発タンパクCreの上流に気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptia)の染色体DNA断片を挿入したライブラリーを作製し、一方でCreの標的配列であるloxPに挟まれたレポーター遺伝子を含むターゲティングベクターを作製することを試みた。しかし、大腸菌を使用して構築したプラスミドベクターをBordetella属細菌に導入する際の効率がきわめて悪いことがわかった。そこで、電気穿孔法と接合法の二つの方法を用いて、Bordetella属細菌が持つDNT遺伝子を相同組換えによって欠失させることをモデル実験として、Bordetella属細菌へのプラスミドベクターの導入方法をあらためて検討した。その結果、電気穿孔法よりも接合法が遺伝子導入の効率がはるかに高いことがわかった。また、大腸菌に比べてBordetella属細菌の増殖速度はきわめて遅いため、あらかじめ対数増殖期に調製したBordetella属細菌を接合に用いるのがもっとも効率のよい遺伝子導入方法であることがわかった。このような予備実験の結果、ようやく、Bordetella属細菌への遺伝子導入の基礎条件が判明し、実際に相同組換えによるDNT遺伝子の欠失変異体の百日咳菌(Bordetella pertussis)を作製することが出来た。この結果を基礎に、将来的にIVET法をBordetella属細菌に応用する予定である。

Bordetella bacteria を were introduced using を て and in vivo expression technology (IVET)を to する とが とが とが the original purpose of this research project である was である. そ こ で, bacterial infection に planning write activity の rise す る プ ロ モ ー タ ー を ク ロ ー ニ ン グ す る た め に heritage 伝 subgroups み in え 発 lure タ ン パ ク Cre の upper に 気 tube branch of sepsis bacteria (Bordetella Bronchiseptia) の chromosome DNA fragment を scions into し た ラ イ ブ ラ リ ー を as し, one party で Cre の mark with column で あ る loxP に carry ま れ た レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を containing む タ ー ゲ テ ィ ン グ ベ ク タ ー を cropping す る こ と を try み た. し か し, coliform を use し て build し た プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー を Bordetella belong to bacterial に import す る interstate の sharper rate が き わ め て 悪 い こ と が わ か っ た. そ こ で, 気 perforation method と legal の two つ の way を with い て, Bordetella belong to bacterial が つ DNT heritage 伝 を son in the same group え に よ っ て owe lost さ せ る こ と を モ デ ル be 験 と し て, Bordetella bacteria へ の プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー の import method を あ ら た め て beg し 検 た. そ の results, 気 perforation method よ り も meet legal が heritage 伝 son import の sharper rate が は る か に high い こ と が わ か っ た. ま た, coliform に than べ て Bordetella belong to bacterial の raised colonization rate は き わ め て 遅 い た め, あ ら か じ め number raised seaborne colonization period に modulation し た Bordetella belong to bacterial を joint に with い る の が も っ と も sharper rate の よ い heritage 伝 import means で あ る こ と が わ か っ た. こ の よ う な reserve be 験 の results, よ う や く, Bordetella bacteria へ の posthumous son 伝 import の basic conditions が.at し, be interstate に in same group え に よ る DNT heritage 伝 の owe son lost - variant の pertussis bacteria (Bordetella pertussis) を cropping す る こ と が た. The <s:1> <s:1> results を basis に, the future にIVET method をBordetella bacteria に応 were pre-determined by する である.

项目成果

Crystal structures reveal a thiol protease-like catalytic triad in the C-terminal region of Pasteurella multocida toxin

• DOI: 10.1073/pnas.0608197104
• 发表时间: 2007-03-20
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Kitadokoro, Kengo;Kamitani, Shigeki;Horiguchi, Yasuhiko
• 通讯作者: Horiguchi, Yasuhiko

Role of Tyr306 in the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin for modulation of tight junction

• DOI: 10.1016/j.bcp.2006.11.013
• 发表时间: 2007-03-15
• 期刊: BIOCHEMICAL PHARMACOLOGY
• 影响因子: 5.8
• 作者: Ebihara, Chiaki;Kondoh, Masuo;Watanabe, Yoshiteru
• 通讯作者: Watanabe, Yoshiteru

Crystallization and preliminary crystallographic studies of the Pasteurella multocida toxin catalytic domain.

多杀性巴氏杆菌毒素催化结构域的结晶和初步晶体学研究。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Acta Crystallograph Sect F Struct Biol Cryst Commun. 62
• 作者: Miyazawa M.;et al.
• 通讯作者: et al.

Role of tyrosine residues in modulation of claudin-4 by the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin

• DOI: 10.1016/j.bcp.2006.10.002
• 发表时间: 2007-01-15
• 期刊: BIOCHEMICAL PHARMACOLOGY
• 影响因子: 5.8
• 作者: Harada, Motoki;Kondoh, Masuo;Watanabe, Yoshiteru
• 通讯作者: Watanabe, Yoshiteru

Role of C-terminal regions of the C-terminal fragment of Clostridium perfringens enterotoxin in its interaction with claudin-4.

• DOI: 10.1016/j.jconrel.2005.07.008
• 发表时间: 2005-11
• 期刊: Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society
• 作者: A. Takahashi;M. Kondoh;A. Masuyama;M. Fujii;H. Mizuguchi;Y. Horiguchi;Yoshiteru Watanabe