Pasteurella multocidaが産生する毒素の細胞内標的分子の同定

多杀性巴氏杆菌毒素胞内靶分子的鉴定

• 批准号: 09770179
• 负责人: 堀口 安彦
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770179/
• 关键词: Pasteurella multocida; 細菌毒素; Bordetella; GTP結合蛋白質; Rho; Pateurella multocida; 毒素

Pasteurella multocidaの産生する毒素(PMT)は細胞に対して強いマイトージェン活性を持ち、細胞内のフォスフォリパーゼcを活性化することが知られているが、その詳細な作用機構は不明である。本研究ではPMTの作用機構解明の手がかりを得るためにPMTに特異的に結合する細胞成分の検索を試みた。マウス線維芽細胞Swiss3T3の破砕液をSDSポリアクリルアミド電気泳動で分離した後にPVDF膜上に転写し、PMTと抗PMT抗体を用いてリガンドオーバーレイアッセイを行った。その結果PMTに特異的に結合すると見られる60kDaのタンパク(p60)を検出した。種々の細胞を用いて調べたところ同様のタンパクはPMTによって形態変化を起こすSwiss3T3、C3H10T1/2、Rat1.COS7で検出され、形態変化を起こさないHep3Bでは検出されなかった。またp60はマウスの脳、肝臓、腎臓のいずれの臓器からも検出されなかった。Swiss3T3細胞の破砕液を遠心分画すると、p60は膜不溶画分に存在することがわかった。PMT遺伝子の改変により種々のPMTの断片ペプチドを作製してp60との結合性を調べたところ、アミノ酸位840-983の領域にp60との結合領域が存在することが示唆された。以上の結果より、PMT感受性の細胞にはPMT結合性の特異的なタンパクp60が存在することがわかった。このp60は細胞の不溶性画分に存在し、全長1,287アミノ酸からなるPMTのアミノ酸位840-983の領域と結合することがわかった。p60はPMTの膜受容体か細胞内標的分子のいずれかではないかと考えられる。

Pasteurella multocida の produce す る toxin (PMT) は cell に し seaborne て strong い マ イ ト ー ジ ェ ン active を hold ち, intracellular の フ ォ ス フ ォ リ パ ー ゼ c を activeness す る こ と が know ら れ て い る が, そ の detailed な role institutions は unknown で あ る. This study で は PMT の role agencies interpret の hand が か り を have る た め に PMT に specific に combining す る components の 検 cable を try み た. マ ウ ス line d bud cells Swiss3T3 の 砕 breaking liquid を SDS ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド electric separation 気 swimming で し た に PVDF membrane after に planning write し, PMT と PMT antibodies を resistance with い て リ ガ ン ド オ ー バ ー レ イ ア ッ セ イ を line っ た. そ の results PMT に specific に combining す る と see ら れ る 60 kda の タ ン パ ク (p60) を 検 out し た. Kind of 々 の cells を using い て adjustable べ た と こ ろ with others の タ ン パ ク は PMT に よ っ て morphology variations を up こ す Swiss3T3, C3H10T1/2, Rat1. COS7 で 検 out さ れ, morphological variations を up こ さ な い Hep3B で は 検 out さ れ な か っ た. Youdaoplaceholder0 p60 った ウス ウス 脳, liver, kidney <s:1> ずれ ずれ, calzal organ ら ら 検 out of されな った った. The <s:1> rupture fluid of Swiss3T3 cells を telecentric fraction すると and p60 <s:1> membrane-insoluble fraction に exist in する すると とがわ とがわ った った. PMT posthumous son 伝 の change - に よ り kind 々 の PMT の fragment ペ プ チ ド を cropping し て p60 と の associativity を adjustable べ た と こ ろ, ア ミ の ノ acid 840-983 field に p60 と が の combining field exist す る こ と が in stopping さ れ た. の above results よ り, PMT susceptibility の cells に は PMT associativity の specific な タ ン パ ク p60 が exist す る こ と が わ か っ た. こ の p60 は cells の insoluble draw points exist に し, total length of 1287 ア ミ ノ acid か ら な る PMT の ア ミ と の ノ acid 840-983 field combining す る こ と が わ か っ た. The intracellular target molecule of p60 <s:1> PMT <s:1> membrane acceptor <e:1> cells <s:1> ずれ ずれ で な な と と と is えられる.

项目成果

Ohnishi et al.: "Pasteurella multocida toxin and Bordetella bronchiseptica dermonecrotizing toxin elicit similar effects on cultured cells by different mechanisms." J.Vet.Med.Sci.60(3). 301-305 (1998)

Ohnishi 等人：“多杀性巴氏杆菌毒素和支气管败血博德特氏菌皮肤坏死毒素通过不同的机制对培养细胞产生类似的作用。”