C型肝炎ウィルス遺伝子の複製開始機構の解析

丙型肝炎病毒基因复制启动机制分析

基本信息

项目摘要

申請者はHCVゲノムの複製機構を明らかにする目的でゲノム3'末端の構造について詳しい解析を行った。その結果,従来知られていなかった新たな構造が3'末端に存在することを発見し,3'X配列と名付けた。この3'X配列は98ヌクレオチドから成り,異なる型間で高度に保存されており,また特徴的な高次構造を取り得ることを明らかにした(Tanaka et al.J.Virol.1996)。3'X配列はゲノムの複製に中心的な働きをすると考えられることから,まず,RNA複製酵素などのHCV遺伝子産物との相互作用について検討した。真核細胞や大腸菌においてHCV遺伝子を発現させ,ゲルシフトアッセイ,UVクロスリンキングアッセイなどにより解析を行ったが,3'X配列との相互作用は検出できなかった。そこで,次に3'X配列と細胞性因子との相互作用を検討したところ,UVクロスリンキングアッセイにより複数の細胞タンパク質が3'X配列と結合することが観察された。種々の領域の3'末端配列を用いた阻害実験などにより,57kDaと38kDaのタンパク質が特異的な結合を示すことがわかった。このうち,結合の最も強い57kDaのタンパク質について詳しく解析した結果,これがポリピリミジントラクト結合タンパク質(PTB)と同一であることを発見した。3'X配列上のPTB結合部位も同定した(論文投稿中)。現在,細胞タンパク質の関与の元でHCVのゲノムがどのような機構で複製されるのか,という視点から研究を進めている。
The applicant shall specify the purpose of HCV replication mechanism, and shall analyze the structure of HCV 3'end in detail. As a result, it is known that there is a new structure at the 3'end of the structure. The 3'X arrangement is 98 ° C, the height of the different types is preserved, and the high-order structure of the characteristics is obtained (Tanaka et al.J.Virol.1996). 3'X alignment is required to examine the interaction between RNA replication enzymes and HCV gene products. Eukaryotic organisms and Escherichia coli contain HCV genes, and their interactions with each other are analyzed by UV and UV detection. The interaction of 3'X alignment and cytokines was investigated in this paper. UV detection of 3'X alignment and cytokine binding was performed. The 3'-terminal alignment of the species domain is blocked by specific binding between 57kDa and 38kDa molecules. The results of the analysis show that the highest concentration of 57kDa protein is the same as that of PTB. The PTB binding sites on the 3'X alignment are identical (in submission). Now, the relationship between cell quality and HCV gene needs to be further studied.

项目成果

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Tanaka T.et al.: "Structure of the 3' Terminus of the Hepatitis C Virus Genome" Journal of Virology. 70・5. 3307-3312 (1996)
Tanaka T.等人:“丙型肝炎病毒基因组的3末端的结构”病毒学杂志70・5 3307-3312(1996)。
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