RAG遺伝子発現制御に関与するシスエレメントの同定

1.ヒトRAG-2遺伝子の構造解析(1) ヒトRAG-2遺伝子については、これまでに翻訳領域を含むエクソンが同定されていたが、cDNAの構造は不明であった。そこでヒトB細胞株Nalm6よりRNAを抽出し、+263〜+282を第一プライマー、+9〜+28を第二プライマーとして5'RACEを行った。その結果、約120bpの第一エクソンと思われる領域を認めた。(2)第一エクソンと思われる領域をプローブとして、ヒトリンパ球ゲノムライブラリーをスクリーニングし、ヒトRAG-2遺伝子を単離した。(3) 単離した遺伝子の塩基配列と、ヒトB細胞株Nalm6ゲノムのサザンマッピングの結果から、ヒトRAG-2遺伝子は2エクソン構造をとること、またヒトRAG-1遺伝子の3'下流にRAG-1遺伝子とは逆向きに存在することが明らかになった。2.ヒトRAG-2遺伝子プロモーター領域の解析(1) 異なる長さのプロモーター領域を含む遺伝子を、ルシフェラーゼをレポーター遺伝子としてもつベクターに挿入した。(2) ヒトB細胞株Nalm6に上記のベクターを導入しルシフェラーゼ活性を測定したところ、-107bpまでの領域が転写に必須であることが確認された。3.今後の計画さらにヒトRAG-1ならびにヒト-2遺伝子の発現制御に関与する領域の同定を試みる。

1.ヒトRAG-2遺伝子の構造解析(1) ヒトRAG-2遺伝子については、これまでに翻訳領域を含むエクソンが同定されていたが、cDNAの構造は不明であった。そこでヒトB細胞株Nalm6よりRNAを抽出し、+263〜+282を第一プライマー、+9〜+28を第二プライマーとして5'RACEを行った。その結果、約120bpの第一エクソンと思われる領域を認めた。(2)第一エクソンと思われる領域をプローブとして、ヒトリンパ球ゲノムライブラリーをスクリーニングし、ヒトRAG-2遺伝子を単離した。(3) 単離した遺伝子の塩基配列と、ヒトB細胞株Nalm6ゲノムのサザンマッピングの結果から、ヒトRAG-2遺伝子は2エクソン構造をとること、またヒトRAG-1遺伝子の3'下流にRAG-1遺伝子とは逆向きに存在することが明らかになった。2.ヒトRAG-2遺伝子プロモーター領域の解析(1) 異なる長さのプロモーター領域を含む遺伝子を、ルシフェラーゼをレポーター遺伝子としてもつベクターに挿入した。(2) ヒトB細胞株Nalm6に上記のベクターを導入しルシフェラーゼ活性を測定したところ、-107bpまでの領域が転写に必須であることが確認された。3.今後の計画さらにヒトRAG-1ならびにヒト-2遺伝子の発現制御に関与する領域の同定を試みる。