赤痢菌virF遺伝子のcpxA-R2コンポーネント制御系による発現制御の研究

cpxA-R2组件调控系统对志贺氏菌virF基因表达调控的研究

• 批准号: 08770202
• 负责人: 中山 周一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770202/
• 关键词: 赤痢; 細胞侵入; virF; 2コンポーネント regulatory system; CpxR-CpxA; DNA結合能; リン酸化

赤痢菌の宿主細胞への侵入能を直接担うipaBCD等の遺伝子群は本菌の保持する大プラスミドにコードされ、その発現には同プラスミド上の2つの正の制御遺伝子virF,invEが必要である。われわれはこのうち、1st regulatorであるvirFの発現がpHによる制御をうけること、その制御には染色体にコードされるtwo-componet regulatory systemの1つであるcpxR-cpxA遺伝子が関与すること、とくにcpxRはvirF発現に必須なファクターであることを遺伝学的データによって示してきた。われわれはCpxRのMalE fusion vectorを用いた大量発現、精製系を確立し、生化学的解析の一環としてvirF上流域への結合能をGel shift assayで検討してみた。virF転写開始点より102bp上流までを含む213bpのプローブでバンドシフトが認められたが、下流端が同一で、転写開始点37bp上流までのプローブ(プロモーター配列を含む)ではシフトが観察できなかった。また、このシフトは精製CpxR標品をAcetylphosphateとプレインキュベーションした場合に増強された。これらの結果は、CpxRがvirFプロモーター上流に直接結合して転写の活性化をおこなうことを示唆するとともに、多くのresponse regulatorと同様にリン酸化したCpxRが認識配列へ結合する活性化型であると理解できる。現在、CpxR結合部位のminimizationのためさらにプローブの種類を増やしてGel shift assayをおこなっている。また、CpxRの結合による転写の活性化を試験管内転写系を用いて確認したい。

The invasion of host cells of Salmonella typhimurium can directly contribute to the maintenance of host cells, and the development of host cells can also contribute to the maintenance of host cells. The expression of virF in the 1st regulator is related to pH control, and the expression of virF in the 1st regulatory is related to the expression of cpxR-cpxA gene in the 1st regulatory. A lot of discovery and purification systems were established for CpxR and MalE fusion vectors, and a link between biochemical analysis and virF binding energy was discussed. virF write start point: 102bp upstream, including 213bp upstream, downstream, same downstream, write start point: 37bp upstream, including 213 bp upstream. In addition, the preparation of CpxR standard was enhanced by the addition of Acetylphosphate. The results are as follows: CpxR is virF, upstream, active, multi-response regulator, iso-active, CpxR is cognitively active, upstream, downstream, downstream Now, the minimization of CpxR binding sites has increased the number of Gel shift assays. The activation of CpxR binding and the in-tube binding system were confirmed.